​牛原代气管上皮细胞培养条件

牛原代气管上皮细胞培养条件

二、牛原代气管上皮细胞收货后处理

A、复苏细胞处理方法：培养至良好状态后灌满完全培养液并封好瓶口是运输细胞的最好办法。收到细胞用75%酒精喷洒整个细胞瓶，严格无菌后将细胞瓶放置培养箱中静置2-4小时以稳定细胞状态。静置后显微镜观察细胞生长情况，并对细胞进行不同倍数拍照保存（最好40x,100x,200x各一张），前三天照片是重要售后依据，不提供照片默认收到状态良好。

B、冻存细胞处理方法：收到细胞后，观察泡沫箱中干冰是否有剩余，冻存管是否完好无损是否有解冻情况，若发现干冰完全汽化或冻存管有解冻破损现象，请及时拍照并与我们联系。如果细胞签收三天内未与我们联系，则默认为收货良好。复苏第一管如有活性问题，请及时联系我们，技术人员与您沟通指导后再复苏第二管，未与我方联系擅自复苏第二管出现问题不予售后。

三、培养步骤

a、细胞传代：如细胞密度超80%，即可进行传代培养，步骤如下：

1) 弃去培养上清，用不含钙、镁离子的PBS润洗细胞1-2次；

2) 加1-2mL消化液（0.25%Trypsin-0.53mM EDTA）于培养瓶中，置培养箱中消化 1-2min ，然后在显微镜下观察细胞消化情况，若细胞大部分变圆并脱落，迅速拿回操作台，轻敲几下培养瓶后，加5ml以上含10%血清的完全培养基终止消化；

3) 轻轻吹打细胞，完全脱落后吸出至离心管中，1000 rpm离心5-8min，弃去上清液，补加1-2mL完全培养基后吹匀；

4) 按5-6mL每瓶补加完全培养基，将细胞悬液按1:2的比例分到新的含5-6 mL完全培养基的6cm培养皿中或者T25培养瓶中。

（即1个T25瓶传代接种至2个T25瓶或者2个6cm的培养皿）

b、细胞冻存：细胞收集参照传代步骤，按冻存数量（推荐每支冻存管5×10⁶左右细胞数量冻存），加入1ml的我司无血清冻存液（货号：C7001），轻轻混匀后，放-80℃冰箱，24小时后转入液氮罐中。

C、细胞复苏：从液氮灌或-80℃冰箱中找到需要复苏的细胞，水浴锅提前打开预热37℃。

1) 将冻存细胞在37℃水浴中迅速摇晃解冻；

2) 将冻存管中的细胞移至含5ml完全培养基的离心管中，1000 rpm离心5min；

3) 弃去上清液，补加5mL完全培养基后吹匀，接种于T25培养瓶中或6cm皿中，培养过夜，第二天换液并检查细胞密度。

四、注意事项：有些细胞贴壁不牢，在运输过程中细胞容易脱落，这是正常现象。如脱落较多可将培养瓶所有培养液收集至离心管，1000rpm离心5-8min，收集上清作过渡培养，沉淀加入胰酶1-2ml，轻轻吹打，重悬，消化1-2分钟后，加5ml完全培养基终止反应。再离心，弃上清，加1-2ml完全培养基重悬。然后按1:2比例进行分瓶传代，补充新的完全培养基至5-6ml/瓶，最后放入细胞培养箱中培养。

三、售后条款：

1）细胞出现问题，可重发的情况有哪些？判定标准是什么？

1. 细胞运输途中遭遇的各种问题，细胞丢失、瓶身破损、培养液严重漏液等，重发；

2. 细胞污染问题，请在收到产品48小时内，给我们提出真实的实验结果，核实后重发；

3. 常温发货的细胞静置24小时后，干冰冻存发货的细胞复苏后24小时后，绝大多数细胞未存活，（需提供真实清晰的细胞状态照片），重发；

4. 干冰冻存发货的细胞复苏后24小时后或常温发货的细胞静置4小时候并且未开封，出现污染，重发；

5. 细胞活性问题，请在收到产品7天内给我们提出真实的实验结果，用台盼蓝染色法鉴定细胞活力，核实后予重发；

6. 细胞收到当天以及第2,3天请拍照，3天未告知的，视为产品合格。4-7天内出现问题有提供收到细胞前3天照片和细胞出现问题时照片以及细胞相关操作的详细步骤的，并跟技术人员沟通的，由技术人员判定为我方责任的，重发。技术人员判定为双方承担责任的由双方进行协商处理或者按合同价的50%收费重发。

2）细胞出现问题，不予以重发的情况有哪些？

1. 客户造成细胞污染，不重发；

2. 客户不正确操作致细胞状态不好，不重发；

3. 非本库推荐细胞培养体系致的细胞状态不好，不重发；

4. 细胞状态不好，未提供细胞培养前3天照片的，不重发；

5. 细胞培养时经其它处理的，不重发；

6. 细胞收到2天内，未告知，不重发；

7. 视具体情况而定。