产品概述

本产品为艾美捷Bethyl Laboratories推出的针对人源53BP1蛋白（p53 Binding Protein 1）的兔多克隆抗体，货号A300-272A。抗体以未标记的完整IgG形式提供，适用于免疫组化（IHC）、免疫沉淀（IP）和蛋白质印迹（WB）应用。该抗体经抗原亲和纯化，特异性识别53BP1蛋白中部区域（第350-400位氨基酸残基之间的表位），对人源和小鼠源53BP1均有反应性，可用于DNA损伤应答、细胞周期检查点调控及相关信号通路研究。

核心参数

参数 详细信息

靶标 53BP1（p53 Binding Protein 1）

反应种属 人、小鼠

应用 IHC, IP, WB

宿主 兔

克隆性 多克隆

形式 完整IgG

免疫原区域 第350-400位氨基酸（参考序列NP_005648.1）

同型 IgG

偶联物 未偶联

纯度 抗原亲和纯化

浓度 1000 µg/ml

保存条件 2 - 8 °C

有效期 收货后1年

缓冲液 Tris-柠檬酸盐/磷酸盐缓冲液，pH 7-8，含0.09%叠氮化钠

制备与纯化

本抗体采用固相固定化技术，使用特异性针对53BP1蛋白的表位进行亲和纯化。具体而言，识别表位定位于人源肿瘤蛋白p53结合蛋白1（53BP1）的第350至400位氨基酸区域（基于GeneID 7158，序列编号NP_005648.1）。免疫球蛋白浓度通过比尔定律测定，设定1 mg/mL IgG在A280波长的吸光度为1.4。

应用与推荐稀释度

蛋白质印迹（Western Blot, WB）

推荐稀释度：1:10,000 – 1:25,000

凝胶建议： 推荐使用3-8% Tris-乙酸盐凝胶，以保证大分子量蛋白（约240 kDa）的有效分离和转印。

操作规范：

所有WB实验均使用5% Milk-TBST作为封闭液和抗体稀释液

一抗孵育条件：过夜孵育

细胞裂解液的WB检测：使用山羊抗兔IgG重链和轻链抗体（货号A120-101P）

免疫沉淀物的WB检测：使用HRP标记的抗兔IgG轻链抗体，并在封闭缓冲液中添加5%正常猪血清（货号S100-020）

免疫沉淀（Immunoprecipitation, IP）

推荐用量：6 µg抗体 / mg裂解液蛋白

免疫组化（Immunohistochemistry, IHC）

推荐稀释度：1:1000 – 1:5000

抗原修复： 对于福尔马林固定、石蜡包埋（FFPE）组织切片，推荐使用柠檬酸缓冲液（pH 6.0）进行热诱导抗原修复。

检测系统： 建议使用基于HRP或荧光标记的检测系统，配合适当封闭步骤降低背景。

产品特性说明

特异性与灵敏度

本抗体经亲和纯化，特异识别53BP1蛋白中部区域（第350-400位）。该表位位于蛋白的布里渊结构域（BRCT）重复区域之前，避免了与其它含BRCT结构域的蛋白（如BRCA1）的交叉反应。由于为多克隆抗体，可识别目标抗原上的多个表位，具有较高的检测灵敏度，适用于低丰度蛋白的检测。经验证，抗体对人源和小鼠源53BP1均有良好的反应性，可用于跨物种实验。

工作浓度优势

WB推荐稀释范围宽（1:10,000-1:25,000），稀释度高，抗体的稀释液消耗少，经济性好。IHC推荐性范围为1:1000-1:5000，用户可根据组织类型和固定条件灵活优化。IP推荐用量明确（6 µg/mg裂解液），降低了预实验摸索的工作量。

储存稳定性

在2-8°C条件下可稳定保存1年（自收货之日起）。缓冲液中含0.09%叠氮化钠作为防腐剂，注意叠氮化物会抑制过氧化物酶活性，若计划进行HRP偶联二抗检测，需在实验前通过透析或脱盐柱去除。

别名： 53BP1; p202; p53-binding protein 1; p53BP1; TDRD30; TP53-binding protein 1; tumor protein 53-binding protein 1; tumor suppressor p53-binding protein 1

使用注意事项

1. 叠氮化物干扰：缓冲液中含有0.09%叠氮化钠。若下游实验使用HRP偶联二抗进行检测，需注意叠氮化物会抑制HRP活性。建议在进行WB或IHC前，通过PBS透析或使用脱盐柱去除叠氮化物。

2. 抗体分装：虽然产品在2-8°C条件下稳定，但若需长期保存或避免反复取用，可考虑分装后保存于-20°C或-80°C。注意避免反复冻融，以免降低抗体活性。

3. 阳性对照建议：

WB：建议使用经电离辐射（如10 Gy γ射线）处理后的HeLa或293T细胞裂解液作为阳性对照，处理后可观察到53BP1灶点相关蛋白条带增强。

IHC：使用人扁桃体或睾丸组织作为阳性对照，这些组织中DNA复制和重组活跃，53BP1表达较高。

IF：虽然未经验证，但基于多克隆抗体的特性，该抗体可能适用于免疫荧光，建议预实验验证。

4. 应用验证范围：本产品已在WB、IP和IHC应用中得到验证，但不保证在其他应用（如免疫荧光、ChIP等）中的效果。如需拓展应用，建议自行进行预实验优化条件。

5. 实验参数优化：推荐的WB稀释范围（1:10,000-1:25,000）为高稀释度起始参考。对于低表达样本或组织裂解液，可适当降低稀释倍数（如1:5,000-1:10,000）。IHC实验中，抗原修复条件和抗体孵育时间需要根据组织类型进行优化。

6. 凝胶选择：53BP1的分子量约为240 kDa，使用常规10% SDS-PAGE凝胶分离效果较差。建议使用3-8% Tris-乙酸酯梯度凝胶，并适当延长转印时间（湿转推荐100 V，2小时或4°C 30 V过夜）。