产品概述
本产品为艾美捷Bethyl Laboratories推出的针对人源AMPK alpha 1蛋白催化亚基的兔多克隆抗体,货号A300-507A。抗体以未标记的完整IgG形式提供,适用于免疫组化(IHC)、免疫沉淀(IP)和蛋白质印迹(WB)应用。该抗体经抗原亲和纯化,特异性识别AMPK alpha 1蛋白中部区域(第375-425位氨基酸残基之间的表位),对人源和小鼠源AMPK alpha 1均有反应性,可用于能量代谢调控、信号转导及相关疾病(如糖尿病、肥胖、癌症)研究。
核心参数
参数 详细信息
靶标 AMPK alpha 1(PRKAA1)
反应种属 小鼠、人
应用 IHC, IP, WB
宿主 兔
克隆性 多克隆
形式 完整IgG
免疫原区域 第375-425位氨基酸(参考序列BAA36547.1)
同型 IgG
偶联物 未偶联
纯度 抗原亲和纯化
浓度 1000 µg/ml
保存条件 2 8 °C
有效期 收货后1年
缓冲液 Tris-柠檬酸盐/磷酸盐缓冲液,pH 7-8,含0.09%叠氮化钠
制备与纯化
本抗体采用固相固定化技术,使用特异性针对AMPK alpha 1蛋白的表位进行亲和纯化。具体而言,识别表位定位于人源5'-AMP活化蛋白激酶催化亚基alpha-1链(AMPK alpha 1)的第375至425位氨基酸区域(基于GeneID 5562,序列编号BAA36547.1)。免疫球蛋白浓度通过比尔定律测定,设定1 mg/mL IgG在A280波长的吸光度为1.4。
应用与推荐稀释度
蛋白质印迹(Western Blot, WB)
推荐稀释度:1:10,000 – 1:25,000
操作规范:
所有WB实验均使用5% Milk-TBST作为封闭液和抗体稀释液
一抗孵育条件:过夜孵育
细胞裂解液的WB检测:使用山羊抗兔IgG重链和轻链抗体(货号A120-101P)
免疫沉淀物的WB检测:使用HRP标记的抗兔IgG轻链抗体,并在封闭缓冲液中添加5%正常猪血清(货号S100-020)
免疫沉淀(Immunoprecipitation, IP)
推荐用量:6 µg抗体 / mg裂解液蛋白
免疫组化(Immunohistochemistry, IHC)
推荐稀释度:1:1000 – 1:5000
抗原修复: 对于福尔马林固定、石蜡包埋(FFPE)组织切片,推荐使用柠檬酸缓冲液(pH 6.0)进行热诱导抗原修复。
产品特性说明
特异性与灵敏度
本抗体经亲和纯化,特异识别AMPK alpha 1蛋白的第375-425位区域,该区域位于激酶结构域与C端调控结构域之间,避免了与其他AMPK家族成员(如AMPK alpha 2)的高度同源区段的交叉反应。由于为多克隆抗体,可识别目标抗原上的多个表位,具有较高的检测灵敏度,适用于检测低表达水平的AMPK alpha 1。经验证,抗体对人源和小鼠源AMPK alpha 1均有良好的反应性,可用于跨物种实验。
工作浓度与经济性
WB推荐稀释范围高达1:10,000-1:25,000,属于高稀释度抗体,单次实验每毫升抗体可检测大量膜条,显著降低单样本检测成本。IHC推荐稀释范围为1:1000-1:5000,可根据组织类型和固定条件灵活调整。IP推荐用量明确为6 µg/mg裂解液,便于用户计算所需抗体量,避免浪费。
储存稳定性
在2-8°C条件下可稳定保存1年(自收货之日起)。缓冲液中含0.09%叠氮化钠作为防腐剂,注意叠氮化物会抑制过氧化物酶活性,若计划进行HRP偶联二抗检测,需在实验前通过透析或脱盐柱去除。
别名: 5'-AMP-activated protein kinase catalytic subunit alpha-1; ACACA kinase; acetyl-CoA carboxylase kinase; AMPK alpha 1; AMPK subunit alpha-1; AMPKa1; HMGCR kinase; tau-protein kinase PRKAA1
核心功能:
能量代谢调控:AMPK是细胞内能量状态的中央感受器。当ATP水平下降、AMP/ATP比值升高时(如饥饿、运动、缺氧等代谢应激),AMPK被上游激酶(如LKB1、CaMKK2)磷酸化激活。激活的AMPK磷酸化下游靶蛋白,关闭合成代谢通路(如脂肪酸合成、胆固醇合成、蛋白质合成),同时开启分解代谢通路(如脂肪酸氧化、糖酵解、自噬),以恢复ATP水平。
脂肪酸与胆固醇合成调控:AMPK alpha 1直接磷酸化并失活乙酰辅酶A羧化酶(ACC)和羟甲基戊二酰辅酶A还原酶(HMGCR),从而抑制脂肪酸和胆固醇的生物合成。这一机制使其成为代谢综合征、非酒精性脂肪肝、高脂血症的药物靶点。
细胞生长与自噬:通过磷酸化TSC2和Raptor抑制mTORC1通路,抑制蛋白质合成并诱导自噬。
葡萄糖稳态:增强胰岛素敏感性,促进葡萄糖摄取(如通过促进GLUT4转位)。
组织分布与病理意义:
AMPK alpha 1在全身广泛表达,而alpha 2主要在骨骼肌和心脏中高表达。PRKAA1基因多态性与2型糖尿病、肥胖、高血压等代谢性疾病风险相关。AMPK活性下降是胰岛素抵抗和衰老的标志之一。此外,AMPK在多种癌症中表现出双向作用:在早期抑制肿瘤生长(通过抑制mTOR诱导细胞周期停滞),但在代谢应激下可帮助肿瘤细胞适应低营养环境,因此成为癌症治疗的热点靶点。