产品概述

本品为艾美捷Bethyl Laboratories推出的兔源抗DDX5（DEAD-box解旋酶5）多克隆抗体（货号：A300-523A），经表位特异性亲和纯化，以未标记形式提供。DDX5（亦称p68、RNA解旋酶p68）是DEAD-box蛋白家族的成员，在RNA代谢的多个层面（包括前体mRNA剪接、RNA合成与降解、核糖体生物发生等）发挥核心作用，并参与转录共激活调控。本抗体识别人和小鼠DDX5蛋白，适用于免疫组织化学、免疫沉淀及免疫印迹检测，是RNA代谢、转录调控、激素信号通路及癌症研究的实用工具。

基本规格参数

参数 具体信息

靶标 DDX5（DEAD-box解旋酶5）

反应种属 小鼠、人

应用 IHC, IP, WB

宿主 兔

克隆性 多克隆

形式 全IgG

免疫原 位于第564位至C端之间的区域

自身抗体亚型 IgG

标记物 未标记

纯度 抗原亲和纯化

抗原种属 人

浓度 200 µg/ml

保存温度 2 - 8 °C

有效期 自收货之日起1年

缓冲液 Tris缓冲盐水，含0.1% BSA和0.09%叠氮钠

生产与纯化工艺

本抗体的生产采用表位特异性亲和纯化策略：

1. 免疫原设计：针对人DDX5蛋白中第575位至C端（第614位）之间的区域（参考序列NP_004387.1）。该C端区域在DDX5和其同源蛋白DDX17之间存在差异，有利于特异性识别。

2. 免疫程序：使用上述合成肽段对兔进行免疫，诱导产生特异性抗血清。

3. 亲和纯化：将DDX5特异的C端表位肽固定于固相支持介质上，通过亲和层析从抗血清中特异性分离目标抗体。该策略确保抗体仅识别目标表位，减少非特异性背景。

4. 浓度测定：依据比尔定律，1 mg/ml IgG在280 nm波长下的吸光度（A280）为1.4。本品最终浓度为200 µg/ml。

表位定位：抗体识别的表位位于人DDX5蛋白的第575-614残基之间（C端区域）。该区域在小鼠DDX5中高度保守，因此抗体可与小鼠源DDX5发生交叉反应。

特异性验证

反应种属：人、小鼠

识别表位：DDX5蛋白C端区域（575-614 aa）

经免疫印迹和免疫沉淀验证的特异性：与人及小鼠DDX5特异性结合

与DDX17的关系：DDX5与DDX17高度同源并形成异源二聚体。本抗体表位位于C端，该区域两者相似度较低，因此抗体可能不识别DDX17或识别效率较低，但用户仍需通过实验验证。

潜在交叉反应：DEAD-box家族成员众多（如DDX3、DDX17等），保守结构域广泛存在。由于本抗体采用C端特异表位，理论上可降低与其他家族成员的交叉反应。

生物学背景

DDX5（基因符号：DDX5，GeneID: 1655，UniProt: P17844）是DEAD-box家族RNA解旋酶的典型代表：

结构特征：DDX5包含DEAD-box蛋白的多个保守基序，其中最著名的是Asp-Glu-Ala-Asp（DEAD）氨基酸序列。该基序赋予ATP依赖的RNA解旋酶活性。

核心功能：

RNA代谢全能参与者：DDX5参与前体mRNA剪接、RNA合成、降解、核输出、翻译起始、RNA二级结构形成、核糖体生物发生以及核糖核蛋白复合物的组装。

转录共激活：除RNA解旋酶功能外，DDX5还可作为转录共激活因子与多种转录因子/共调节因子相互作用，包括：雌激素受体α（ERα，共激活）、CBP/p300、Smad3、p53。通过这些互作，DDX5调控雌激素信号、TGF-β应答和DNA损伤应答等相关基因的表达。

与DDX17协同：DDX5与DDX17形成异源二聚体，两者在多种细胞过程中功能互补。

临床意义：DDX5在多种癌症（乳腺癌、结直肠癌、肝癌、胶质瘤等）中异常表达，影响细胞增殖、侵袭和化疗敏感性，是潜在的治疗靶点和预后标志物。

应用与推荐稀释比例

以下推荐稀释比例为起始参考值。需注意，并非所有列出的应用均已在本实验室完成具体验证，建议用户根据样本类型和实验体系进行梯度优化。

应用 推荐稀释比例或用量 备注

免疫组织化学 1:200 - 1:1000 FFPE组织切片推荐使用柠檬酸缓冲液pH6.0进行抗原修复

免疫沉淀 6 µg/mg 裂解物 即每毫克总蛋白使用6微克抗体

免疫印迹 1:2000 - 1:10,000 详见下方标准操作条件

免疫印迹标准操作条件（经实验室验证）：

封闭液和抗体稀释液：5% 脱脂牛奶-TBST

一抗孵育：过夜（4°C或室温）

细胞裂解液WB的二抗：使用山羊抗兔IgG（H+L）抗体（货号A120-101P）

免疫沉淀样本WB的二抗：使用抗兔IgG轻链HRP偶联抗体，并在封闭缓冲液中添加5%正常猪血清（货号S100-020），以避免重链交叉信号干扰

免疫组织化学（IHC）典型流程（FFPE组织切片）：

1. 脱蜡和水化

2. 抗原修复：使用柠檬酸缓冲液（pH 6.0），高压或微波加热进行抗原修复

3. 封闭内源性过氧化物酶（如适用）

4. 一抗孵育：1:200-1:1000，4°C过夜

5. 二抗及显色

DDX5主要定位于细胞核（核浆和核仁），在IHC中应呈现核染色模式。

免疫沉淀（IP）指南：

每毫克细胞裂解物总蛋白使用6 µg抗体（本品浓度为200 µg/ml，即每毫克裂解物需使用30 µl抗体）

建议使用蛋白A/G琼脂糖珠（兔源抗体推荐蛋白A）

裂解缓冲液推荐使用非变性裂解液（如含1% NP-40的RIPA缓冲液，不含SDS或SDS<0.1%）

设正常兔IgG作为同型对照

阳性对照建议：

人源细胞系（如HeLa、HEK293T、MCF-7）或小鼠细胞系（如NIH/3T3）的全细胞裂解物

DDX5在大多数细胞系中广泛表达，可选用

阴性对照建议：

使用正常兔IgG替代一抗

使用DDX5敲低（siRNA）或敲除细胞裂解物（如CRISPR DDX5敲除细胞系）

使用与保存注意事项

保存条件：请于2-8°C条件下保存，切勿冷冻。反复冻融会导致抗体变性失效。在指定条件下，自收货之日起1年内稳定有效。

缓冲液成分：本抗体溶于Tris缓冲盐水，含0.1% BSA（稳定剂）和0.09%叠氮钠（防腐剂）。BSA的存在有助于防止抗体在低浓度下吸附于管壁，但如需进行无蛋白的标记反应（如生物素标记），建议先通过透析去除BSA和叠氮钠。

稀释缓冲液建议：

WB：使用5%牛奶-TBST

IHC：使用含1% BSA或正常血清的PBS

IP：使用裂解缓冲液本身稀释抗体

分子量信息：人DDX5蛋白的理论分子量约为69 kDa（UniProt P17844）。在还原性SDS-PAGE中，可观察到约68-70 kDa的条带（有时称为p68）。若在预测分子量以外位置观察到额外条带，可能为降解产物或翻译后修饰。