白蛋白（Albumin）是人血清中含量最丰富的蛋白质，在维持血浆胶体渗透压、pH稳态以及脂肪酸、氨基酸、激素等内源性和外源性化合物的转运中发挥核心生理功能。准确测定生物样本中的白蛋白浓度，对于肝肾功能评估、营养状态监测以及血脑屏障通透性研究具有重要临床与科研价值。由艾美捷代理Bethyl推出的人白蛋白定量ELISA试剂盒（货号：E88-129），为相关实验提供规范化参考。

一、产品基本规格与检测原理

该试剂盒采用双抗体夹心ELISA（Sandwich ELISA）设计，配套生物素-链霉亲和素-HRP（Biotinylated-Streptavidin-HRP）放大系统，兼具高灵敏度和宽检测范围的双重优势。

1.检测原理：将人白蛋白特异性捕获抗体预包被于96孔板中。待测样本及标准品中的白蛋白与捕获抗体结合后，依次加入检测抗体（生物素标记）和HRP标记的链霉亲和素，形成"捕获抗体-目标蛋白-生物素化抗体-链霉亲和素-HRP"复合物。最后以TMB为显色底物，在450 nm波长下读取吸光值，样本中白蛋白浓度与显色强度呈正相关。

2.定量范围与灵敏度：检测范围为0.69 – 500 ng/mL，动态区间覆盖近三个数量级，可同时满足低丰度样本（如脑脊液、尿液）和高丰度样本（如血清、血浆）的定量需求，无需频繁稀释重测。

3.样本适用性：已验证可用于血清（Serum）、血浆（Plasma）、脑脊液（CSF）、乳汁（Milk）和尿液（Urine）五种生物流体，覆盖了白蛋白检测的主要样本类型。

二、试剂盒组分与保存条件

该试剂盒为即用型设计，2-8°C冷藏保存，有效期自收货之日起6个月。完整组分清单如下：

组分 | 规格 | 数量

白蛋白预包被96孔板 | 可拆卸条板 | 1块

白蛋白标准品 | 500 ng/瓶（冻干粉） | 2瓶

检测抗体（生物素标记） | 12 mL | 1瓶

20×稀释缓冲液C | 25 mL | 1瓶

HRP溶液A（链霉亲和素-HRP） | 12 mL | 1瓶

TMB底物液 | 12 mL | 1瓶

终止液（含硫酸） | 12 mL | 1瓶

20×洗涤缓冲液 | 50 mL | 1瓶

封板膜 | — | 6张

保存提示：所有组分均于2-8°C保存，请勿冷冻。冻融可能导致包被蛋白脱落或酶活性不可逆损失。标准品复溶后建议当日使用完毕，剩余部分不宜再次冻存。

三、实验操作关键要点

为确保定量结果的准确性和重复性，建议重点关注以下环节：

1.样本稀释策略：

血清/血浆：白蛋白含量极高（约35-55 mg/mL），需用稀释缓冲液进行大倍数预稀释（建议稀释倍数1:100,000以上），使检测值落入标准曲线线性范围。

脑脊液/尿液/乳汁：白蛋白含量相对较低，可根据预实验适当降低稀释倍数或直接检测，避免过度稀释导致低于检测下限（0.69 ng/mL）。

2.标准曲线制备：将500 ng标准品用稀释缓冲液按2倍或3倍梯度稀释，至少设置6-8个浓度点（建议覆盖0.69 - 500 ng/mL全范围），每个浓度设复孔以保证统计学可靠性。

3.洗涤操作：使用20×洗涤缓冲液稀释为1×工作液。每步洗涤推荐使用自动洗板机或手工洗涤（每孔300 μL，洗涤3-5次），确保每次浸泡时间不少于30秒，以彻底去除未结合物质，降低背景信号。

4.显色与终止：加入TMB底物后，室温避光孵育约15-20分钟（具体时间需根据显色进度实时观察），待标准品高浓度孔出现明显蓝色梯度后，加入终止液（颜色由蓝转黄），在30分钟内于450 nm波长读取吸光值。

四、总结

该人白蛋白定量ELISA试剂盒凭借0.69-500 ng/mL的宽检测范围和五种生物流体的广谱适用性，可灵活适配多种研究场景。配套生物素-链霉亲和素-HRP放大系统保障了检测灵敏度的同时维持了操作流程的标准化。遵循推荐的样本稀释策略、严格洗涤规范和标准曲线制备流程，可获得准确、可重复的白蛋白定量数据，为肝功能评估、肾小球滤过功能监测及血脑屏障研究提供可靠的方法学支撑。