PBRM1（Polybromo 1，亦称BAF180）是SWI/SNF染色质重塑复合物中PBAF亚型的关键组成亚基，通过其六个溴结构域识别组蛋白乙酰化信号，在转录调控、DNA损伤应答和细胞周期控制中发挥重要作用。近年来，PBRM1作为多种肿瘤中的抑癌基因受到广泛关注。由艾美捷代理Bethyl推出的一款靶向PBRM1 C端区域的亲和纯化兔多克隆抗体（货号A301-591A），为染色质生物学和肿瘤研究提供规范化工具参考。
一、产品基本规格与表位定位
该抗体为兔源多克隆IgG，以完整免疫球蛋白分子形式提供，未经标记（Unconjugated），为用户自主选择检测体系保留了灵活性。其关键质控参数如下：
1.免疫原与表位区域：免疫原对应人PBRM1蛋白C端第1639至1689位氨基酸区域（参考序列AAP34197.1，GeneID 55193）。该表位位于蛋白C末端附近，避开了六个溴结构域的高度同源区，有助于提升靶向特异性，降低与其他含溴结构域蛋白的交叉反应风险。
2.纯化工艺与浓度：采用表位特异性亲和层析纯化，将目标肽段固定于固相载体，从抗血清中特异捕获识别该区域的抗体组分。抗体浓度为1000 µg/mL（基于A280测定，1 mg/mL IgG对应吸光值1.4），高浓度储备液为用户在多种应用中的灵活稀释提供了充足空间。
3.保存体系与稳定性：储存于含0.09%叠氮化钠（防腐剂）的Tris-柠檬酸盐/磷酸盐缓冲液（pH 7-8）中。2-8°C冷藏条件下可稳定保存一年。
二、推荐应用与实验条件
该抗体覆盖流式细胞术（Flow Cyt）、免疫组织化学（IHC）、免疫沉淀（IP）和蛋白质印迹（WB）四种核心应用场景，各应用的建议工作条件如下：
应用 | 推荐工作条件 | 关键实验提示
Western Blot（常规） | 1:2,000 - 1:10,000 |封闭/稀释：5%脱脂牛奶-TBST，一抗4°C孵育过夜。二抗：推荐抗兔IgG H&L链抗体（如A120-101P）。
Western Blot（IP后检测） | 同左 |关键变更：使用抗兔IgG轻链HRP偶联二抗，封闭缓冲液中添加5%正常猪血清（S100-020），以阻断IP抗体重链（~55 kDa）的干扰信号。
免疫沉淀（IP） | 6 µg抗体 / mg蛋白裂解液 | 根据裂解液总量精确计算抗体用量。建议设置同型IgG阴性对照，以区分特异性富集与非特异性结合。
免疫组织化学（IHC） | 1:1,000 - 1:5,000 |必须进行抗原修复：使用pH 6.0柠檬酸盐缓冲液对FFPE切片进行热诱导抗原修复。高稀释度窗口有助于降低背景染色。
流式细胞术（Flow Cyt） | 1 µL / 1×106细胞 |固定/透化：4%甲醛固定后，以90%甲醇进行透化处理，以确保抗体进入胞内与核内靶标结合。
IP-WB特殊注意事项：免疫沉淀后检测时，常规抗兔IgG H&L链二抗会同时识别IP抗体的重链（~55 kDa）和轻链（~25 kDa），而PBRM1分子量约为180 kDa，重链干扰位置低于目标条带，轻链干扰更远，因此常规H&L链二抗在PBRM1 IP-WB中造成的干扰相对有限。但仍建议使用轻链特异性二抗以获得最洁净的背景，特别是当目标蛋白信号较弱时。
三、靶蛋白生物学背景与操作注意事项
靶蛋白背景：PBRM1（BAF180）是PBAF（SWI/SNF-B）染色质重塑复合物的特有亚基，区别于含有ARID1A/BAF250的BAF复合物。其C端区域（即本抗体靶向区域）包含一个高迁移率族（HMG）盒结构域，参与DNA结合和复合物稳定性调控。PBRM1通过其溴结构域识别组蛋白H3K14ac等乙酰化标记，将PBAF复合物募集至特定染色质区域。功能研究表明，PBRM1在DNA损伤应答中通过调控p21表达介导细胞周期阻滞，并在肾癌等多种肿瘤中高频突变，发挥抑癌功能。阿
关键操作注意事项：
1.分子量确认：PBRM1理论分子量约180 kDa。在WB中应使用预染蛋白Marker确认条带位置，避免与分子量相近的非特异性条带（约160-200 kDa区域）混淆。
2.蛋白酶抑制：PBRM1作为大分子量核蛋白，对蛋白酶降解较为敏感。裂解缓冲液中务必添加新鲜配制的蛋白酶抑制剂混合物（含PMSF、抑肽酶、亮肽素等），操作全程保持4°C低温。
3.IP裂解液选择：建议使用含温和去垢剂（如0.5% NP-40或Triton X-100）的裂解缓冲液，并辅以超声破碎以充分释放核内PBRM1，提高IP富集效率。避免使用SDS等强变性剂，以免破坏抗原-抗体结合表位。
4.IHC抗原修复：对于FFPE切片，pH 6.0柠檬酸盐热修复是必要条件。建议在1:1,000-1:5,000范围内设置梯度，选择信噪比最佳的工作浓度。高稀释度（如1:5,000）有助于降低因抗体浓度过高导致的背景染色。
5.流式细胞术的固定与透化：PBRM1为核内蛋白，需采用4%甲醛固定以交联保存细胞结构，再用90%甲醇进行强透化处理，确保抗体能够进入细胞核与靶标结合。甲醇同时具有部分固定作用，有助于维持核形态。
四、总结
综上所述，该款亲和纯化的兔抗PBRM1（BAF180）多克隆抗体凭借其C端表位特异性、高浓度储备液（1000 µg/mL）及多平台广泛验证（Flow Cyt/IHC/IP/WB），为PBAF染色质重塑复合物的功能研究提供了可靠工具。遵循推荐的IHC高稀释区间（1:1,000-1:5,000）、IP用量（6 µg/mg裂解液）及流式细胞术的固定/透化方案（甲醛→甲醇），配合严格的蛋白酶抑制和洗涤流程，可望获得特异、清晰、可重复的检测结果，为染色质调控、肿瘤抑制机制及DNA损伤应答研究提供有力的方法学支撑。