1. 产品概述

由艾美捷代理Bethyl推出的亲和纯化兔抗TopBP1多克隆抗体（货号：A300-111A），经抗原亲和纯化获得，特异性识别人源TopBP1蛋白（DNA拓扑异构酶II结合蛋白1）。抗体靶向TopBP1蛋白C末端第1400至1435位氨基酸区域，适用于免疫沉淀（IP）及蛋白质印迹（WB）等应用，是研究DNA复制、DNA损伤检查点及细胞周期调控的重要工具。

2. 核心规格参数

项目 | 规格详情

靶标| TopBP1（DNA拓扑异构酶II结合蛋白1）

验证反应种属| 人，小鼠

宿主| 兔

克隆性| 多克隆

抗体形式| 完整IgG分子

免疫原表位| 人TopBP1蛋白C末端区域，位于第1400位至终止端（第1435位）之间（参照NP_008958.1）

亚型| IgG

标记物| 无标记（非偶联）

纯度| 抗原亲和纯化

浓度| 1000 µg/mL（1 mg/mL）

缓冲液体系| Tris-柠檬酸盐-磷酸盐缓冲液，pH 7–8，含0.09%叠氮化钠

储存条件| 2 – 8 °C（请勿冷冻）

保质期| 自收货之日起1年

3. 产品制备与质控

纯化工艺：采用固相载体固定TopBP1特异性表位肽段，进行亲和层析纯化，确保仅富集识别目标区域的高亲和力抗体。

表位定位：本抗体（货号A300-111A）识别的表位位于人TopBP1蛋白第1400位至C末端（第1435位）之间（参考NP_008958.1及GeneID 11073）。

浓度测定：免疫球蛋白浓度依据比尔-朗伯定律测定，其中1 mg/mL IgG在280 nm波长处的吸光值（A280）为1.4。

4. 推荐工作稀释度

以下稀释度基于标准实验条件确立，具体用量需根据样品类型及实验体系进一步优化：

应用方法 | 推荐稀释度/用量 | 备注

Western Blot（WB）| 1:2,000 – 1:10,000 | 使用5% Milk-TBST作为封闭液和抗体稀释液，一抗孵育过夜。检测细胞裂解物时推荐使用抗兔IgG H&L链二抗（如A120-101P）。

Immunoprecipitation（IP）| 6 µg/mg 裂解物 | 免疫沉淀后WB检测时，建议使用抗兔IgG轻链HRP标记二抗，并在封闭液中添加5%正常猪血清（Cat. No. S100-020）以消除重链干扰。

5. 靶标生物学背景

TopBP1（DNA拓扑异构酶II结合蛋白1）是一种多功能衔接蛋白，最早发现其与DNA拓扑异构酶IIβ（Topo IIβ）的C末端区域相互作用。TopBP1含有多个BRCA1 C末端（BRCT）结构域，这些结构域是介导蛋白质-蛋白质相互作用的核心模块，使其能够参与多种细胞过程：

DNA复制：TopBP1在DNA复制起始中发挥重要作用，通过其BRCT结构域与复制起始蛋白（如Treslin、GINS复合物）相互作用，促进复制叉的建立和进程。

DNA损伤检查点：在DNA损伤发生后，TopBP1通过激活ATR激酶信号通路介导S期和G2/M期检查点的启动，防止受损DNA进入有丝分裂。

转录调控：TopBP1能够通过非Rb依赖性机制抑制E2F1的转录活性。具体而言，TopBP1招募SWI/SNF染色质重塑复合物组分（Brg1和Brm）至靶基因启动子区域，从而调控细胞周期相关基因的转录。

临床相关性：TopBP1在多种肿瘤中表达异常升高，与肿瘤细胞的增殖活性和放化疗抵抗相关。本抗体能够有效检测内源性TopBP1蛋白水平及分子量变化，适用于细胞周期调控、DNA损伤修复及肿瘤机制研究。

6. 使用与储存注意事项

1. 储存：请于 2–8 °C 避光保存。切勿冷冻，以免抗体变性或聚合。

2. 稳定性：在推荐储存条件下，自收货之日起1年内稳定有效。

3. 防腐剂提示：缓冲液含0.09%叠氮化钠，对呼吸系统及黏膜有刺激性，操作时请穿戴适当防护装备。若需进行抗体偶联标记，请预先透析去除叠氮化钠。

4. 种属交叉性：已验证可识别人及小鼠来源的TopBP1。用于其他种属时建议预先验证。

5. 信号检测建议：TopBP1分子量较大（约170 kDa），建议使用低浓度SDS-PAGE凝胶（6-8%）进行电泳分离，并适当延长转膜时间以确保高分子量蛋白的有效转移。

*本说明书仅供研究使用，不适用于诊断或治疗程序。