在Sortase介导的蛋白质定点修饰应用中，野生型Sortase A对钙离子的依赖性常成为反应体系设计的限制因素——钙离子可能干扰某些金属敏感型底物或与缓冲液组分发生沉淀。针对这一痛点，由艾美捷代理BPS Bioscience推出的重组金黄色葡萄球菌Sortase A钙非依赖型七突变体（货号：100666）在野生型基础上引入七处点突变，彻底解除酶活性对钙离子的依赖，为酶动力学研究、抑制剂筛选及选择性谱分析提供了更宽泛的反应条件兼容性。

突变设计：从五突变到七突变的活性升级

该蛋白涵盖金黄色葡萄球菌Sortase A第26至206位氨基酸残基，分子量约22 kDa，N端携带6×His标签便于亲和纯化。其突变组合在经典五突变（P94R、D160N、D165A、K190E、K196T）基础上新增E105K与E108A两处突变。其中，D165A是解除钙离子依赖性的关键突变——该残基在野生型中参与钙离子配位，突变后酶构象趋于“预激活”状态，催化活性不再受外源钙离子调控；E105K与E108A则进一步优化了活性中心附近的电荷环境，协同提升底物识别与催化效率。经活性验证，该七突变体在无钙条件下仍保持高催化活性，适用于含EDTA或EGTA等金属螯合剂的反应体系。

纯度与内毒素指标

SDS-PAGE鉴定纯度≥85%，满足多数生化分析需求。尤为值得关注的是，该产品内毒素水平≤1 EU/mg，这一指标对于涉及细胞培养或活细胞表面标记的实验尤为重要——低内毒素水平可有效排除脂多糖对细胞活性和信号通路的干扰，确保实验结果反映Sortase反应本身而非内毒素引起的非特异性效应。

活性验证与质控体系

活性检测采用同品牌Sortase A Assay Kit（货号79937），通过梯度滴定法对不同浓度下的酶活性进行定量验证，确保每批次产品均达到预设比活性标准。用户可将该酶作为阳性对照或标准品，用于构建高通量筛选平台的剂量-响应标准曲线。

储存与操作要点

产品以水相缓冲液形式提供（40 mM Tris pH 8.0, 110 mM NaCl, 2.2 mM KCl, 20%甘油，含可变浓度咪唑），-80°C条件下效期至少6个月。使用前冰上解冻并轻柔混匀——严禁涡旋振荡以防止蛋白剪切变性。开管前快速离心收集液滴。建议分装为单次使用小份，液氮速冻后长期保存，避免反复冻融引发活性损失。

核心应用场景

该srtA七突变体适用于三大研究方向：

酶动力学参数测定：在无钙条件下通过荧光法测定不同酶浓度下初始反应速率，对比野生型与突变体的K_m和k_cat差异，系统评估突变对催化循环各步骤的贡献。

Sortase抑制剂筛选：无需在反应体系中额外添加钙离子，避免了钙离子与某些候选化合物（如磷酸酯类、螯合剂类）之间的非特异性相互作用，简化了筛选流程的变量控制。

选择性谱分析：测试含LPXTG变体序列的底物肽段库，评估该酶对非经典识别基序的底物容忍度，为正交化Sortase系统或多底物并行标记策略提供数据支撑。

在蛋白质连接应用中，该酶的钙非依赖性使其兼容更广泛的缓冲体系（如PBS、HEPES等生理pH范围缓冲液），可用于含C端LPETGX基序的目标蛋白与含N端甘氨酸的荧光基团、生物素或聚合物链的位点特异性偶联，亦适用于活细胞表面的瞬时标记，无需担忧钙离子对细胞信号或培养基组分的干扰。

总之，重组金黄色葡萄球菌Sortase A钙非依赖型七突变体以七处功能增益突变解除钙离子依赖性为核心优势，辅以低内毒素水平和宽缓冲液兼容性，为蛋白质化学生物学、抗体工程及抗菌药物发现领域提供了更加灵活、可靠的工具酶选择。

文献参考：

Hirakawa H., et al. 2015 Biotechnol J 10(9): 1487-92.