一、产品背景
前列腺素E2(PGE2)是一种由花生四烯酸经COX酶和PGE2合酶(PGES)催化,通过中间产物PGG2和PGH2生成的二十烷酸类活性脂质介质。所有细胞在激活后均可从头合成PGE2,其来源为质膜磷脂释放的花生四烯酸或外源性游离花生四烯酸。
PGE2以自分泌或旁分泌方式作用于四种G蛋白偶联受体——EP1、EP2、EP3和EP4,这些受体在不同组织中的分布和细胞定位存在差异,可分别激活PKA、β-catenin、EGF、MAPK、NF-κB及PI3K/Akt等多条信号通路。因此,PGE2广泛参与炎症反应、生育与分娩、胃黏膜完整性与运动调节,以及肿瘤内外的免疫调控等多种生理病理过程。
二、产品概述
由艾美捷代理Cayman推出的前列腺素E2(PGE2)单克隆ELISA检测试剂盒(货号:514010)是一款竞争性酶联免疫检测试剂盒,适用于尿液、血浆、组织培养上清液及其他样本基质中PGE2的定量检测。
核心性能参数:
检测范围:7.8 - 1,000 pg/ml
灵敏度(80% B/B0):约 13 pg/ml
最低检测限(LLOD):11 pg/ml
三、检测原理
本试剂盒基于竞争性免疫分析原理:
1. 样品中的PGE2与PGE2-乙酰胆碱酯酶偶联物(PGE2 Tracer)竞争结合有限的PGE2单克隆抗体结合位点。
2. 由于Tracer浓度固定而PGE2浓度可变,Tracer与抗体结合的量与孔中游离PGE2浓度成反比。
3. 抗体-抗原复合物通过山羊抗小鼠IgG预包被结合于酶标板孔底。
4. 洗涤去除未结合物质后,加入Ellman‘s试剂(含AChE底物),酶促反应生成黄色产物,在412 nm处有强吸收。
5. 吸光度与结合于孔内的Tracer量成正比,即与样品中游离PGE2浓度成反比。
> 数学关系:吸光度 ∝ [结合Tracer] ∝ 1/[PGE2]
四、试剂盒储存与稳定性
所有组分应于-20°C储存,并在包装标注的有效期内使用。按此条件保存,试剂盒性能可得到保障。
五、需自备的实验材料
1. 酶标仪:可读取405-420 nm吸光度。
2. 可调移液器:推荐使用多通道或重复移液器以提高通量。
3. 超纯水:推荐电阻率18.2 MΩ·cm、总有机碳(TOC)< 10 ppb的水质。注意:玻璃双蒸水或去离子水可能不满足要求,建议使用Cayman超纯水(Item No. 400000)。
4. 样本前处理相关材料(详见说明书第11页)。
六、交叉反应性
本试剂盒对PGE2具有高度特异性,与主要相关物质的交叉反应率如下:
化合物 | 交叉反应率
PGE2 | 100%
PGE2-乙醇酰胺 | 100%
PGE2-1-甘油酯 | 100%
PGE3 | 43.0%
PGE1 | 18.7%
8-iso PGE2 | 2.5%
Sulprostone | 1.25%
6-keto PGF₁α | 1.0%
其他测试化合物(含AA、LTB4、TXB2等) | <0.01%
注:PGE3(43%)和PGE1(18.7%)具有一定交叉反应性,在分析含有这些物质的样本时需注意。
七、操作流程概述
1. 加样:分别加入标准品、样品和Tracer至相应孔中。
2. 免疫反应:加入PGE2单克隆抗体,室温孵育。
3. 洗涤:弃去液体,洗涤酶标板以去除未结合物质。
4. 显色:加入Ellman‘s试剂,避光孵育显色。
5. 读数:于412 nm处读取吸光度。
质量控制要点:
标准品和样品建议设复孔,复孔CV值应<10%。
样品值若超出标准曲线范围,需用试剂盒提供的缓冲液适当稀释后重测。
使用前将所有试剂恢复至室温,避免气泡产生。
八、应用场景
炎症模型中的PGE2水平监测
肿瘤微环境中免疫调节研究
生殖生物学(排卵、分娩相关研究)
肾脏功能与胃肠道生理研究
药物对COX/PGE2通路调控作用的药效学评价
九、文献参考
1. Wang, B., Wu, L., Chen, J., et al. Metabolism pathways of arachidonic acids:Mechanisms and potential therapeutic targets. Signal Transduct. Target. Ther.6(1), 94 (2021).
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4. Jin, K., Qian, C., Lin, J., et al. Cyclooxygenase-2-prostaglandin E2 pathway:A key player in tumor-associated immune cells. Front. Oncol. 13, 1099811(2023).
5. Willis, A.L. and Cornelsen, M. Repeated injection of prostaglandin E2 in ratpaws induces chronic swelling and a marked decrease in pain threshold.Prostaglandins 3(3), 353-357 (1973).
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7. Robert, A., Schultz, J.R., Nezamis, J.E., et al. Gastric antisecretory andantiulcer properties of PGE2, 15-methyl PGE2, and 16,16-dimethyl PGE2.Intravenous, oral and intrajejunal administration. Gastroenterology 70(3),359-370 (1976).
8. Arvind, P., Papavassiliou, E.D., Tsioulias, G.J., et al. Prostaglandin E2 downregulates the expression of HLA-DR antigen in human colon adenocarcinomacell lines. Biochemistry 34(16), 5604-5609 (1995).
9. Maxey, K.M., Maddipati, K.R. and Birkmeier, J. Interference in enzymeimmunoassays. J. Clin. Immunoassay 15, 116-120 (1992)/=.