一、产品概述

本产品由艾美捷Bethyl Laboratories推出，是一款针对人TFEB蛋白的高亲和力兔多克隆抗体（货号 A303-673A），经抗原亲和纯化制备。该抗体适用于免疫沉淀（IP）及蛋白质印迹（WB）检测，可同时识别人和小鼠来源的靶蛋白，仅供研究使用。

TFEB（Transcription factor EB）是MiT/TFE家族成员之一，属于碱性螺旋-环-螺旋亮氨酸拉链（bHLH-Zip）转录因子。TFEB能够特异性识别E-box序列（3′-CANNTG-5′），与自身或家族其他成员（如TFE3、MITF）形成二聚体后高效结合DNA。TFEB在细胞中发挥双重核心功能：一方面与TFE3协同激活T细胞中CD40L的表达，参与CD4+ T细胞依赖的抗体应答及胸腺依赖性体液免疫；另一方面，TFEB通过识别溶酶体相关基因调控区的CLEAR-box序列（5′-GTCACGTGAC-3′），激活溶酶体基因的表达，是溶酶体生物发生和自噬通路的关键调控因子。此外，TFEB还可识别免疫球蛋白重链增强子中的γ-E3 box。近年来，TFEB已成为溶酶体稳态、自噬、代谢疾病及神经退行性疾病研究的热点靶点。

二、产品规格

参数 详细信息

靶标 TFEB

反应种属 小鼠， 人

应用 IP， WB

宿主 兔

克隆性 多克隆

形式 完整IgG

免疫原 位于第426位至C末端之间

同种型 IgG

偶联物 未偶联

纯度 抗原亲和纯化

抗原种属 人

浓度 1000 µg/mL（1 mg/mL）

缓冲液 Tris-柠檬酸/磷酸缓冲液，pH 7–8，含0.09%叠氮化钠

储存条件 2–8°C

有效期 自收货之日起1年

三、靶标详细信息

3.1 别名

ALPHATFEB， BHLHE35， class E basic helix-loop-helix protein 35， T-cell transcription factor EB， TCFEB。

3.2 功能背景

TFEB是调控细胞清除通路的核心转录因子，其功能涵盖以下方面：

溶酶体生物发生：TFEB识别CLEAR-box（协同溶酶体表达与调控元件），激活超过200个溶酶体相关基因的表达，包括组织蛋白酶、溶酶体膜蛋白等。

自噬调控：TFEB诱导自噬体形成及自噬溶酶体融合所需的基因（如LC3、p62、ATG家族），是细胞应对营养匮乏和应激的关键调节因子。

免疫调节：在活化的CD4+ T细胞中，TFEB与TFE3共同激活CD40L转录，促进B细胞类别转换和生发中心形成，介导胸腺依赖性体液免疫应答。

代谢与疾病：TFEB活性受mTORC1磷酸化调控（位于Ser142/Ser211位点）。在溶酶体贮积症、帕金森病、阿尔茨海默病及非酒精性脂肪肝中，TFEB的核转位和转录活性异常，成为潜在治疗靶点。

四、抗体制备与纯化

4.1 免疫原及表位定位

本抗体采用的免疫原对应人TFEB蛋白序列中第426位至C末端之间的区域。经精确定位，A303-673A所识别的表位位于第426–476氨基酸区间（参考序列NP_009093.1）。该区域位于C端转录激活域（TAD）内，远离bHLH二聚化和DNA结合域，因此抗体不太可能干扰TFEB与DNA或二聚化伴侣的结合，适合IP及后续功能研究。

4.2 纯化方法

抗体通过抗原亲和层析纯化。将针对TFEB C端表位（第426–476位）的特异性多肽固定于固相载体，使抗血清中的特异性IgG结合于该表位，经洗脱获得高纯度抗体。此法确保最终产品中只保留识别目标表位的抗体分子，显著降低非特异性背景，尤其适合IP-WB联用实验。

4.3 浓度测定

免疫球蛋白浓度采用比尔定律测定，以1 mg/mL IgG在280 nm下的吸光度（A280）为1.4作为标准。实测浓度为1000 µg/mL（1 mg/mL）。

4.4 缓冲液与防腐剂

抗体储存于Tris-柠檬酸/磷酸缓冲液（pH 7–8），含0.09%叠氮化钠作为防腐剂。注意：叠氮化钠有毒，操作时请佩戴防护手套。若用于细胞培养或体内实验，使用前应通过透析或超滤去除。

五、储存与稳定性

收到产品后，请将抗体置于2–8°C条件下储存。切勿冷冻，反复冻融会导致抗体变性聚集、效价下降。在推荐的储存条件下，自收货之日起1年内可保持稳定。若需长期保存，可分装后冻存于-20°C或-80°C，分装时避免稀释，每份建议一次用完，避免反复冻融。

六、产品特点总结

1. 双种属反应性：同时识别人和小鼠TFEB，适用于跨物种研究。

2. C端表位精确定位：抗原亲和纯化基于第426–476位氨基酸，位于转录激活域，不影响二聚化及DNA结合，适合IP及蛋白互作研究。

3. 高浓度（1 mg/mL）与宽稀释范围：WB稀释比1:2000–1:25,000，6 µg/mg裂解液即可高效IP，节约抗体用量。

4. 低背景IP-WB优化：推荐使用轻链HRP二抗+5%正常猪血清体系，消除免疫球蛋白重/轻链对目标条带的干扰（TFEB约55-65 kDa，轻链25 kDa和重链55 kDa可能干扰）。尤其重链55 kDa与TFEB接近，必须使用轻链特异性二抗。

5. 长期稳定性：2–8°C储存1年有效，简化冷链管理。

注意：本产品仅限研究使用，不得用于诊断或治疗。用户应自行验证抗体在其特定实验体系中的适用性。以上信息覆盖了A303-673A抗体的全部规格、应用参数及背景知识，使用者可据此快速建立TFEB的WB和IP检测方案，获得可靠且可重复的结果。