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DMG-PEG 2000

MCE 国际站：DMG-PEG 2000

品牌：MedChemExpress (MCE)

货号：HY-112764

CAS：160743-62-4

纯度：≥98.0%

存储条件：-20°C，密封保存，避光防潮 *溶剂中：-80°C，6个月；-20°C，1个月（密封保存，避光防潮）

运输条件：美国大陆的室温；其他地方可能有所不同。

产品活性：DMG-PEG 2000 用于 siRNA 转染 (siRNA delivery) 的脂质体的制备，能够提高转染效率。DMG-PEG 2000 也可被用于脂质纳米颗粒制备，用于口服质粒 DNA 的体内传递途径，DMG-PEG 2000 可以提高纳米颗粒的黏液渗透性和传递效率。

生物活性：DMG-PEG 2000 用于制备用于siRNA 递送 的脂质体，提高了体外转染效率。 DMG-PEG 2000 还用于脂质纳米颗粒，用于体内口服质粒 DNA 递送方法，通过简单的表面修饰提高纳米颗粒的粘液渗透性和递送效率^[1]。 体外 NP-3（0.05-1.6 mg/mL；24 小时）不会降低 293T、HepG2、A549 和 HeLa 细胞系的细胞毒性，但 DPPC 和 DMG-PEG 包被的纳米颗粒降低了细胞毒性。此外，DPPC/DMG-PEG/(lPEI/DNA)纳米粒(NP-3)在293细胞中的转染效率得到提高，观察到最大转染效率(～76% eGFP阳性细胞)^{[1 ]}. 体内： NP-3（口服给药；每只小鼠 150 μg DNA；单剂量）在 12、24 和 36给药后，腹膜内注射荧光素底物以验证其渗透性。 NP-3 组在治疗后 12-24 小时在肝脏、肺和肠道区域保持高荧光素酶表达。此外，NP-3 在 12 到 12 小时内表现出比 NP-1 或 NP-2 组高 1.5 倍的信号强度24小时后给药^[2].

体外：脂质纳米粒的制备 这里我们提供了 FDA 批准的 mRNA-1273（一种 COVID-19 mRNA 疫苗）中 LNP 的脂质摩尔比。该配方中脂质的摩尔比为 SM-102：DSPC：胆固醇：DMG-PEG 2000 = 50：10：38.5：1.5[1]，RNA 与脂质的重量比为 0.05（wt/wt）。 A. 脂质混合物制备 1. 将脂质溶解在乙醇中，并制备 10 mg/m 储备溶液。脂质储备液可储存在 −20°C 下备用。 注意 1：可离子化的脂质通常是液体。由于其粘度，应始终对其进行称重，而不是依赖自动移液器的体积。 注意 2：溶液中的胆固醇应保持温度（>37℃）以保持流动性。及时转移胆固醇溶液以避免冷却。 2. 按照说明制备脂质混合物溶液。每毫升脂质混合物添加以下成分：572 µL 10mg/mL SM-102 (HY-134541)、240 µL 10mg/mL 胆固醇 (HY-N0322)、127 µL 10mg/mL DSPC (HY-W040193) 和 61 µL DMG-PEG 2000 (HY-112764)。充分混合溶液，得到澄清溶液。此混合物含有 10 mg 总脂质。注 3：脂质和比例的选择可以根据需要进行更改，这将影响 LNP 特性（大小、多分散性和功效）和所需的 mRNA 量。B. mRNA 制备 1. 用 100 mM pH 5 醋酸钠缓冲液制备 166.7 µg/mL mRNA 溶液。注 4：脂质：mRNA 重量比影响包封效率。其他重量比可作为替代配方制备，用户应进行相应调整。C. 混合有三种常用方法可实现溶液的快速混合：移液器混合法、涡旋混合法和微流体混合法。所有这些混合方法都可以用于各种应用。值得注意的是，移液器混合法和涡旋混合法可能产生更不均匀的 LNP，包封效率更低，且容易发生变化。微流体装置能够以高度可控、可重复的方式快速混合，从而实现均匀的 LNP 和高包封效率。在这些装置中，乙醇脂质混合物和水溶液在单独的流中快速混合。当两股流混合时形成 LNP，然后将其收集到单个收集管中。1. 移液器混合法：1.1。吸取 3 mL mRNA 溶液并快速将其添加到 1 mL 脂质混合溶液中（通常使用 1:3 的乙醇脂质混合物和水性缓冲液的比例。）快速上下移液 20-30 秒。1.2. 将所得溶液在室温下孵育长达 15 分钟。1.3. 混合后，将 LNPs 对 PBS（pH 7.4）透析 2 小时，使用 0.2 μm 过滤器进行无菌过滤，并在 4°C 下储存。2. 涡旋混合方法：1.1. 在涡旋混合器上以中速涡旋 3 mL mRNA 溶液。然后，快速将 1 mL 脂质混合溶液加入涡旋溶液中（通常使用 1:3 的乙醇脂质混合物和水性缓冲液的比例。）。继续涡旋所得分散体 20-30 秒。1.2将所得溶液在室温下孵育15分钟。 1.3. 混合后，将LNPs在PBS（pH 7.4）中透析2小时，使用0.2μm过滤器无菌过滤，并在4°C下保存。 3. 微流控混合方法： 1.1将3 mL mRNA缓冲液和1 mL脂质混合物溶液在微流控装置中以12 mL / min的总流速混合（通常使用1：3的乙醇脂质混合物与水性缓冲液的比例）。 注5：可以改变流速比和总流速等参数来微调LNPs。 1.2. 混合后，将LNPs在PBS（pH 7.4）中透析2小时，使用0.2μm过滤器无菌过滤，并在4°C下保存。 参考文献 1. Curr Issues Mol Biol. 2022 年 10 月 19 日；44(10):5013-5027。2. Curr Protoc. 2023;3(9):e898。MCE 尚未独立证实这些方法的准确性。它们仅供参考。

体内：NP-3（口服给药；每只小鼠 150 μg DNA；单剂量）在给药后 12、24 和 36 小时腹膜内注射荧光素底物以验证其通透性。NP-3 组在给药后 12-24 小时内在肝脏、肺和肠道区域维持高荧光素酶表达。此外，NP-3 在口服给药后 12 至 24 小时内的信号强度比 NP-1 或 NP-2 组高 1.5 倍[2]。MCE 尚未独立证实这些方法的准确性。它们仅供参考。

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参考文献：

[1]. Tianqi Nie, et al. Surface Coating Approach to Overcome Mucosal Entrapment of DNA Nanoparticles for Oral Gene Delivery of Glucagon-like Peptide 1.ACS Appl Mater Interfaces. 2019 Aug 21;11(33):29593-29603.