犬恶丝虫（心丝虫）染料法荧光定量PCR试剂盒

检验原理

采用SYBR Green染料法实时荧光定量PCR技术，针对犬恶丝虫基因保守区域设计特异性引物，通过荧光信号实时监测核酸扩增过程，实现定性及定量分析。

试剂组成

犬恶丝虫扩增液：50μL×1管

犬恶丝虫反应液：950μL×1管

阳性质控品（无传染性DNA片段）：50μL×1管（1×10^8拷贝/μL）

阴性质控品：50μL×1管

说明书：1份

注：不同批号组分不可混用。

适用仪器

兼容主流荧光定量PCR仪，包括：

ABI系列（如7500、StepOnePlus）

MX3000P/3005P

LightCycler（Roche）

Bio-Rad（CFX系列）

Eppendorf等

样本要求

样本类型：胃液分泌物、呕吐物或培养物（需避免交叉污染）。

保存条件：短期-20℃保存，长期需-70℃以下（≤6个月），运输时使用2~8℃冰袋。

操作步骤

样本处理：按规范提取核酸，避免DNA/RNA酶污染。

标准曲线制备：

将阳性质控品10倍梯度稀释（10^2~10^7拷贝/μL），用于定量分析。

PCR反应体系配制：

按比例混合扩增液、反应液及模板，每反应20μL。

上机检测：

设置程序：预变性（95℃, 5min）→循环扩增（95℃ 15s, 60℃ 30s, 40次）→熔解曲线分析。

性能参数

灵敏度：可检测低至10^3拷贝/mL的靶标。

特异性：引物经优化，不与相近物种核酸交叉反应。

重现性：CV值≤5%。

注意事项

实验需分区操作（样本处理、试剂配制、扩增区），避免污染。

自备耗材：无酶离心管、滤芯吸头、移液器等。

熔解曲线分析需确认单峰，排除非特异性扩增。

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