丝状网尾线虫染料法荧光定量PCR试剂盒
商品属性
产品名称 | 丝状网尾线虫染料法荧光定量PCR试剂盒 | 英文名称 | Dictyocaulus filaria Dye-based qPCR Kit |
规格 | 50T | 货号 | PR3477 |
产品概述
本试剂盒基于染料法荧光定量PCR技术开发，专用于丝状网尾线虫（Dictyocaulus filaria）的快速、高灵敏度检测。通过优化引物及反应体系，可实现对病原体核酸的特异性扩增与定量分析，适用于动物样本或环境样本的科研检测。
技术原理
引物设计：针对丝状网尾线虫高度保守的基因区域设计特异性引物，避免与其他微生物发生交叉反应。
荧光检测：采用嵌合染料（如SYBR Green I）与双链DNA结合，通过实时监测荧光信号实现定量分析。
阳性对照：内置阳性对照模板，辅助区分假阴性结果。
试剂盒组分
主反应混合液：含PCR缓冲液、dNTPs、热启动DNA聚合酶、荧光染料等。
引物混合液：预混优化后的正向/反向引物（序列见附录）。
阳性对照：丝状网尾线虫标准DNA模板。
无核酸酶纯水：用于反应体系配制。
实验步骤
样本处理：提取待测样本DNA（建议使用柱式提取法）。
反应体系配制（20μL/反应）：
10μL 主反应混合液
1μL 引物混合液
1μL 模板DNA
8μL 无核酸酶纯水
PCR程序设置：
预变性：95℃ 5分钟
扩增循环（40次）：95℃ 15秒 → 60℃ 30秒（采集荧光信号）
数据分析：通过标准曲线或阈值循环数（Ct值）计算目标核酸浓度。
性能参数
灵敏度：可检测低至10拷贝/μL的靶标DNA。
特异性：仅扩增丝状网尾线虫，与常见寄生虫无交叉反应。
重复性：批内/批间变异系数（CV）≤5%。
注意事项
实验需在无菌环境下操作，避免核酸污染。
试剂解冻后需充分混匀，避免反复冻融。
阳性对照与待测样本需分区域操作，防止交叉污染。
附录：引物序列
正向引物：5'-AACCTGAGCCTGCAGAAACATTAT-3'
反向引物：5'-CCACAGGTTTTGCAAACGCTATA-3'
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