米德尔堡病毒染料法荧光定量RT-PCR试剂盒
商品属性
产品名称 | 米德尔堡病毒染料法荧光定量RT-PCR试剂盒 | 英文名称 | Middelburg Virus Dye-based qRT-PCR Kit |
规格 | 50T | 货号 | PR3383 |
检测原理与特点
技术原理：基于染料法荧光定量PCR技术，通过特异性引物扩增米德尔堡病毒保守序列，结合荧光信号实时监测靶标核酸浓度。
核心优势：
高灵敏度：可检测低至几百拷贝/反应的病毒核酸。
高特异性：引物针对米德尔堡病毒保守区设计，避免与其他病毒核酸交叉反应。
即开即用：预混优化试剂，用户仅需提供模板DNA/RNA。
双重功能：支持定性和定量检测，定量线性范围达5个数量级。
内控设计：提供阳性对照（1×10^6~10^8拷贝/μL）和阴性对照，确保结果可靠性。
试剂盒组成
主反应混合液：2×qPCR MagicMix（含荧光染料、dNTPs、聚合酶等）
专用模板稀释液：1 mL（用于样本稀释）
引物混合物：特异性米德尔堡病毒引物（预混）
阳性对照：米德尔堡病毒PCR阳性对照（1×10^8拷贝/μL）
使用手册：详细操作流程及注意事项
实验操作步骤
样本制备：
建议设置N+2个提取反应（N为待测样本数，额外增加阳性对照和阴性对照）。
阳性对照：10μL试剂盒提供的阳性对照+水至样本终体积。
阴性对照：以水替代模板。
PCR扩增：
反应体系：20μL/反应（含模板、引物混合物、主反应液）。
推荐循环参数：预变性95℃ 5min；扩增40循环（95℃ 15s，60℃ 30s）。
结果分析：
定性检测：通过扩增曲线和Ct值判定阴阳性。
定量检测：根据标准曲线计算病毒拷贝数。
电泳验证（可选）：取5-10μL产物进行1.5%-2%琼脂糖凝胶电泳，预期条带约200bp。
注意事项
污染控制：若阴性对照出现扩增，表明实验污染，需重新检测。
样本要求：建议使用纯化后的病毒RNA/DNA，避免抑制剂干扰。
保存与运输：避免反复冻融，试剂解冻后需充分混匀。
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关键字： 米德尔堡病毒;染料法荧光定量;PCR试剂盒;