牛轮状病毒B组染料法荧光定量RT-PCR试剂盒
商品属性
产品名称
英文名称
Bovine Rotavirus Group B Dye-based qRT-PCR Kit
规格
50T
货号
PR3424
产品概述
本试剂盒采用染料法荧光定量RT-PCR技术,特异性检测牛轮状病毒B组(BRV-B)RNA。适用于科研用途(如动物病原监测、流行病学调查等),不可用于临床诊断。
试剂盒组成
RT-PCR预混液:含逆转录酶、Taq DNA聚合酶、dNTPs及荧光染料(如SYBR Green)。
阳性对照:灭活BRV-B核酸片段(10E2-10E7拷贝/μL,需独立稀释,避免污染)。
阴性对照:无核酸酶水。
模板稀释液:用于标准品梯度稀释。
操作步骤
样本处理:
提取待测样本RNA(建议使用商品化RNA提取试剂盒)。
阳性对照稀释:
按10倍梯度稀释阳性对照(如10E7至10E2拷贝/μL),标记为7-2号管,每管加入45μL稀释液。
反应体系配制(20μL/反应):
预混液10μL + 模板5μL + 无核酸酶水补至20μL。
PCR程序:
逆转录:50℃ 15分钟;预变性:95℃ 3分钟;扩增:95℃ 15秒 → 60℃ 30秒(40循环,荧光采集)。
注意事项
操作需在独立洁净区域进行,避免气溶胶污染。
阳性对照需最后添加,使用后密封处理。
不同机型可能需调整ROX参比染料(参照仪器说明书)。
结果判读
Ct值≤35且扩增曲线呈S型:判定为阳性。
无扩增信号或Ct值>40:阴性。
建议设置内参基因(如GAPDH)排除假阴性。
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