雷氏普罗威登斯菌染料法荧光定量PCR试剂盒
商品属性
产品名称 | 雷氏普罗威登斯菌染料法荧光定量PCR试剂盒 | 英文名称 | Providencia rettgeri Dye-based qPCR Kit |
规格 | 50T | 货号 | PR3431 |
产品组分
2×qPCR MagicMix：500μL，含SYBR Green荧光染料、dNTPs及优化缓冲体系。
荧光PCR专用模板稀释液：1mL，用于标准品或样本稀释。
雷氏普罗威登斯菌特异性引物混合液：100μL，针对保守序列设计，避免交叉反应。
阳性对照（可选）：无传染性DNA片段（需独立操作避免污染）。
技术特点
高特异性：引物基于Providencia rettgeri保守区设计，不与相近菌种发生交叉反应。
高灵敏度：检测下限可达数百拷贝/反应。
闭管操作：一管式反应减少气溶胶污染风险。
宽动态范围：定量检测时线性范围覆盖5个数量级（需配合标准曲线）。
即开即用：用户仅需提供DNA模板，无需额外优化反应体系。
操作流程
1. 样本准备
提取待测样本DNA，建议浓度≥10 ng/μL。
若需定量，需制备标准曲线（10^2~10^7拷贝/μL梯度稀释阳性对照）。
2. PCR反应体系配制（20μL/反应）
| 组分 | 体积（μL） |
| 2×qPCR MagicMix | 10 |
| 引物混合液 | 1 |
| 模板DNA | 2 |
| ddH₂O | 7 |
3. 扩增程序
预变性：95℃, 3 min；
循环阶段（40 cycles）：95℃ 10 s → 60℃ 30 s（采集荧光信号）；
熔解曲线分析：65℃~95℃，每0.5℃升温，持续5 s。
注意事项
分区操作：标准品稀释与样本处理需在独立区域进行，避免交叉污染。
质量控制：建议每批次实验设置阴性对照（无模板对照）及阳性对照。
数据解读：熔解曲线应为单一峰，Ct值≤35且扩增曲线呈典型S型可判为阳性。
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