莱氏无胆甾原体染料法荧光定量PCR试剂盒
商品属性
产品名称 | 莱氏无胆甾原体染料法荧光定量PCR试剂盒 | 英文名称 | Acholeplasma laidlawii Dye-based qPCR Kit |
规格 | 50T | 货号 | PR3434 |
检测原理
基于荧光染料（如SYBR Green I）与双链DNA结合发光的特性，通过实时监测PCR扩增过程中的荧光信号变化，实现对目标DNA的定量分析。
产品规格
包装规格：50次/盒（20μL反应体系）
保存条件：-20℃避光保存，有效期12个月。
运输条件：低温（冰袋或干冰）运输。
适用范围
检测类型：
定性检测：判定样品中是否存在莱氏无胆甾原体DNA。
定量检测：线性范围≥5个数量级，需配合标准品使用。
适用样本：
环境样本（污水、土壤、植物组织等）。
动物及人类样本（生殖道、鼻腔、口腔等）。
实验流程
1. 样本制备
样本数量：若检测N个样品，需设置N+2个提取反应（含1个阳性对照PC和1个阴性对照NC）。
PC制备：使用试剂盒提供的牛乳头瘤病毒PCR阳性对照（1×10^6拷贝/μL），按样本体积稀释至相同终体积。
NC制备：以无菌水作为阴性对照。
DNA提取：兼容市售细菌DNA提取试剂盒，需自备纯化试剂。
2. PCR扩增
反应体系：20μL/反应（含预混液、引物、DNA模板）。
扩增程序：
预变性：95℃ 5分钟；
循环阶段（40 cycles）：95℃ 15秒 → 60℃ 30秒（荧光采集）。
3. 结果分析
电泳验证（可选）：
取5-10μL扩增产物，1.5%-2.0%琼脂糖凝胶电泳。
预期产物长度：200bp。
质量控制：
若阴性对照（NC）出现扩增条带，表明实验污染，结果无效。
注意事项
操作规范：
分区操作（样本处理区、PCR配制区、扩增区），避免交叉污染。
使用无核酸酶耗材。
假阴性风险：
建议设置内参基因或重复检测以排除抑制物干扰。
应用限制：
仅限科研用途，不可用于临床诊断。
常见问题
扩增效率低：检查DNA纯度或优化退火温度。
无信号：确认试剂保存条件及模板完整性。
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