大鼠补体成分4(C4)elisa试剂盒

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1. 检测原理

采用双抗体夹心ELISA技术，特异性识别大鼠补体C4的α链（95kDa）。预包被抗大鼠C4单抗捕获完整C4分子（205kDa），生物素标记的二抗通过链霉亲和素-HRP系统催化TMB显色，450nm吸光度值与C4浓度正相关。

2. 核心组分

组分  规格  保存条件  关键特性

预包被板  96T  2-8℃（含干燥剂）  抗α链单抗（克隆号：MAB641）

C4标准品  0-200μg/mL  -20℃  纯化大鼠血清C4冻干粉

检测抗体  120μL  -20℃（避光）  生物素标记抗β链抗体

EDTA抗凝管  10支  室温  专用补体保存管

补体灭活剂  5mL  4℃  56℃ 30分钟灭活用

3. 性能参数

检测范围：1.56-100μg/mL（可扩展至500μg/mL）

灵敏度：0.4μg/mL（基于2SD空白值）

 样本类型：

最佳：新鲜血清（避免冻融）

可选：肝组织匀浆（1:9稀释）

交叉反应：

大鼠C4：100%

小鼠C4：<5%

人C4：<0.1%

精密度：

批内CV：4.2-6.8%

批间CV：7.5-9.3%

4. 样本处理规范

4.1 血清采集

使用预冷EDTA管采集全血

立即冰浴，4℃ 1500×g离心15分钟

分装后-80℃保存（仅冻融1次）

4.2 肝组织处理

取100mg肝右叶

加入900μL冷PBS（含10mM EDTA）

超声破碎（冰浴，20kHz，3×5秒脉冲）

4.3 特殊处理

补体活性检测：样本需用GVB++缓冲液稀释

灭活对照：56℃水浴30分钟

5. 实验操作要点

标准曲线制备

梯度稀释：0、1.56、3.12、6.25、12.5、25、50、100μg/mL

复溶液：含5mM EDTA的PBS

关键步骤

孵育温度：严格控制在37±0.5℃

洗板液：含0.01% Tween-20的VB缓冲液

显色时间：精确控制15±0.5分钟

质控要求

空白OD值：≤0.08

最低检测限回收率：85-115%

溶血样本需备注（Hb>0.1mg/mL）

6. 主要应用方向

肝病研究：肝硬化模型补体消耗

自身免疫病：SLE样综合征监测

移植排斥：补体激活程度评估

感染模型：细菌感染后补体动态

7. 注意事项

样本特殊性

避免使用反复冻融样本（C4易降解）

溶血样本需超速离心（10000×g，10分钟）

标准曲线

推荐log-log拟合

要求R2≥0.985

异常处理

100μg/mL样本需1:5稀释重测

异常低值需复查采集过程

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