吴茱萸探针法PCR鉴定试剂盒

产品概述

本试剂盒基于探针法荧光定量PCR技术（qRT-PCR），专用于吴茱萸（Fructus evodiae）的核酸定性及定量检测。通过特异性引物和TaqMan探针设计，结合实时荧光信号采集，实现高灵敏度、高特异性的检测，适用于科研用途（不可用于临床诊断）。

检测原理

探针法原理：

探针5'端标记荧光报告基团（如FAM），3'端标记淬灭基团。

PCR扩增时，Taq酶的5'→3'外切酶活性切割探针，释放荧光信号，信号强度与扩增产物量成正比。

技术流程：

反转录：将RNA模板逆转录为cDNA（若检测RNA样本）。

扩增与检测：通过40个循环的PCR反应（94℃变性、60℃退火/延伸），实时监测荧光信号。

产品组分

| 成分 | 规格 | 主要功能 |

| 探针法qRT-PCR缓冲液 | 500 μL | 提供反应体系基础环境 |

| 探针法qRT-PCR酶混合液 | 100 μL | 含逆转录酶、Taq酶等 |

| 荧光PCR专用模板稀释液 | 1 mL | 标准品稀释及阴性对照 |

| 吴茱萸引物混合液 | 100 μL | 特异性扩增靶序列 |

| 吴茱萸qRT-PCR探针 | 50 μL | 荧光信号标记 |

| 阳性对照（1×10⁸拷贝/μL） | 50 μL | 标准曲线制备 |

| 说明书 | 1份 | 操作指南 |

操作步骤

1. 标准曲线制备

将阳性对照按10倍梯度稀释（10⁷~10²拷贝/μL），独立操作避免污染。

标记离心管（7~2号），依次加入稀释液并震荡混匀，冰上保存。

2. 样本RNA提取

建议设置阴性对照（NC）和阳性对照（PC）。

使用兼容的RNA提取试剂盒纯化样本，或选用配套核酸释放剂。

3. qRT-PCR反应体系（20 μL）

| 成分 | 体积（μL） |

| qRT-PCR缓冲液 | 10 |

| 酶混合液 | 2 |

| 探针 | 1 |

| 引物混合液 | 2 |

| 样本RNA/DNA | 5 |

4. 反应程序

| 步骤 | 温度 | 时间 |

| 逆转录 | 50℃ | 30 min |

| 预变性 | 94℃ | 10 min |

| 扩增（40循环） | 94℃ 15 sec → 60℃ 1 min（采集FAM通道信号） |

数据分析

定量检测：以标准曲线log值为横轴、Ct值为纵轴，计算样本浓度。

定性检测：

阳性：Ct≤35，扩增曲线呈S型。

阴性：Ct≥40或无扩增。

可疑（35<Ct<40）：需复测确认。

注意事项

分区操作：样本处理、试剂配制、扩增需在不同区域进行，防止交叉污染。

质量控制：每批次实验需包含阴/阳性对照。

保存条件：试剂避光保存，避免反复冻融。

适用范围：仅限科研使用，不可用于临床诊断或治疗。

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