检测原理

本试剂盒基于实时荧光定量PCR(qPCR)技术,采用探针法检测菟丝子特异性核酸序列。探针5'端标记荧光报告基团(如FAM),3'端标记淬灭基团。当PCR扩增时,Taq酶的5'→3'外切酶活性切割探针,释放荧光信号,通过实时监测荧光强度实现靶序列的定量与定性分析。
产品名称 | 菟丝子探针法PCR鉴定试剂盒 | 英文名称 | Semen Cuscutae Probe-based PCR Identification Kit |
产品规格 | 50T | 产品分类 | 荧光定量PCR |
检测类型 | PCR检测 | 产品货号 | PR4957 |

产品特点

高灵敏度与特异性:引物及探针针对菟丝子保守序列设计,避免交叉反应。
即开即用:预混优化试剂,仅需提供样品RNA模板。
内控设计:含阳性对照(1×10^8拷贝/μL),可区分假阴性结果。
双重应用:支持定量分析(标准曲线法)和定性检测(Ct阈值判定)。
试剂盒组成

| 成分 | 规格/包装量 |
| 探针法qRT-PCR缓冲液 | 500μL |
| qRT-PCR酶混合液 | 100μL |
| 荧光PCR模板稀释液 | 1mL |
| 菟丝子引物混合液 | 100μL |
| 菟丝子探针 | 50μL |
| 阳性对照(1×10^8拷贝/μL) | 50μL |
| 说明书 | 1份 |
实验步骤

1. 标准曲线制备(10^2~10^7拷贝/μL梯度)
使用阳性对照按10倍梯度稀释,标记6个离心管(7号至2号),依次加入稀释液并混匀,冰上暂存。
2. 样品RNA提取
建议设置阴性对照(NC,水)和阳性对照(PC,阳性对照稀释液)。
使用兼容的RNA提取试剂盒或柱式法纯化样本RNA。
3. qRT-PCR反应体系(20μL)
| 成分 | 样品管/标准曲线管 | 阴性对照管 |
| qRT-PCR缓冲液 | 10μL | 10μL |
| 酶混合液 | 2μL | 2μL |
| 探针 | 1μL | 1μL |
| 引物混合液 | 2μL | 2μL |
| 模板RNA/标准品/水 | 5μL | 5μL(水) |
4. 反应程序
| 步骤 | 温度 | 时间 |
| 逆转录 | 50℃ | 30分钟 |
| 预变性 | 94℃ | 10分钟 |
| 扩增(40循环) | 94℃ 15秒 → 60℃ 1分钟(采集FAM信号) |
数据分析
定量分析:以阳性对照log浓度为横轴,Ct值为纵轴绘制标准曲线,计算样本浓度。
定性判定:
阳性:Ct≤35,扩增曲线呈S型。
阴性:Ct≥40或无扩增。
可疑(35<Ct<40):需复测确认。
注意事项

操作需在独立洁净区域进行,避免交叉污染。
试剂解冻后需完全混匀,短暂离心后使用。
探针避光保存,避免反复冻融。
本产品仅限科研使用。
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关键字: 菟丝子;探针法;PCR鉴定试剂盒;
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