连翅探针法PCR鉴定试剂盒
商品属性
产品名称 | 连翅探针法PCR鉴定试剂盒 | 英文名称 | Fructus Forsythiae Probe-based PCR Identification Kit |
规格 | 50T | 货号 | PR5057 |
产品概述
本试剂盒基于实时荧光定量PCR技术，专用于连翅（Fructus forsythiae）的定性及定量鉴定。通过特异性引物和探针靶向目标基因保守区域，结合反转录（RT）和扩增步骤，实现对样本中目标核酸的高灵敏度检测。适用于科研、中药材鉴定及质量控制等领域。
检验原理
RNA提取：通过硅基质膜离心柱法或兼容的RNA提取试剂盒纯化样本RNA。
反转录：以RNA为模板，在反转录酶作用下合成cDNA。
荧光定量PCR：采用TaqMan探针法，通过35个扩增循环（变性-退火-延伸）放大目标片段，实时监测荧光信号，定量分析初始模板浓度。
试剂盒组成
| 组分 | 规格（50T/盒） |
| RT-PCR反应液 | 750 μL ×1管 |
| 混合酶液 | 150 μL ×1管 |
| 阳性对照（灭活cDNA）| 40 μL ×1管 |
| 阴性对照（基因组DNA）| 40 μL ×1管 |
| 说明书 | 1份 |
储存条件与有效期
储存温度：-20℃避光保存，避免反复冻融。
有效期：12个月。
自备仪器与试剂
仪器：荧光定量PCR仪、离心机、微量移液器、冰盒。
耗材：RNase-free枪头、离心管、PCR管。
其他试剂：RNA提取试剂盒（如QIAGEN或Roche）、DEPC水。
操作步骤
1. 样本处理
适用样本：植物组织、中药材粉末或提取的RNA。
保存要求：短期保存于2-8℃，长期需-80℃冻存，避免反复冻融。
2. RNA提取
按兼容的RNA提取试剂盒说明书操作，建议使用柱提法或免提核酸释放剂。
3. 标准曲线制备（定量检测适用）
将阳性对照按10倍梯度稀释（10^1–10^6拷贝/μL），用于建立标准曲线。
4. PCR反应体系（20 μL/反应）
| 组分 | 体积 |
| RT-PCR反应液 | 15 μL |
| 混合酶液 | 3 μL |
| 模板RNA/cDNA | 2 μL |
5. 扩增程序
| 步骤 | 温度/时间 | 循环数 |
| 反转录 | 50℃, 10 min| 1 |
| 预变性 | 94℃, 3 min | 1 |
| 扩增 | 94℃, 30 s | 35 |
| | 55℃, 30 s | |
| | 72℃, 30 s | |
| 最终延伸 | 72℃, 7 min | 1 |
结果判读
定量分析：根据标准曲线计算样本拷贝数。
定性分析：
阳性：Ct值≤36，扩增曲线呈S型。
阴性：Ct值≥40或无扩增。
灰区（36<Ct<40）：需重复检测。
注意事项
防污染：分区操作（样本处理、试剂配制、扩增区），使用一次性耗材。
质量控制：每批次实验需包含阴/阳性对照。
探针避光：反应液需避光保存，避免荧光淬灭。
生物安全：实验废弃物需经消毒处理（如10%次氯酸钠）。
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