灵芝探针法PCR鉴定试剂盒
商品属性
产品名称 | 灵芝探针法PCR鉴定试剂盒 | 英文名称 | Ganoderma Probe-based PCR Identification Kit |
规格 | 50T | 货号 | PR5053 |
产品概述
本试剂盒基于探针法荧光定量PCR技术，专用于灵芝（Ganoderma）的快速、高特异性核酸鉴定。通过优化引物和探针设计，确保仅扩增目标物种DNA，避免与其他微生物或植物发生交叉反应。适用于科研领域的定性或定量分析，严禁用于临床诊断。
产品特点
即开即用：用户仅需提供DNA/RNA模板，试剂预混缓冲液与酶体系，简化操作流程。
高特异性与灵敏度：引物及探针针对灵芝保守序列设计，检测限低至10<sup>1</sup>拷贝/μL。
内置对照系统：含阳性对照（1×10<sup>8</sup>拷贝/μL）和阴性对照，有效区分假阴性。
兼容性强：与主流核酸提取试剂盒兼容，支持40–50次反应（20–40 μL体系）。
双重检测模式：支持定性（阴阳性判定）和定量（标准曲线法）分析，线性范围达5个数量级。
规格及成分
| 成分 | 规格/包装量 | 保存条件 |
| PCR MagicMix 3.0 | 1 mL（红盖） | -20℃避光 |
| 灵芝特异性引物混合液 | 100 μL（白盖） | -20℃避光 |
| 阳性对照（DNA片段） | 50 μL（1×10<sup>8</sup>拷贝/μL） | 单独存放，-20℃ |
| 荧光PCR稀释液 | 1 mL（亮黄色） | -20℃ |
| 核酸释放剂（试用装） | 20次（1 mL，绿盖） | 室温干燥环境 |
| 使用手册 | 1份 | — |
实验流程
1. 样本制备
DNA提取：推荐使用兼容性柱式提取试剂盒，设置N+2个样本（含阳性/阴性对照）。阳性对照需稀释至10<sup>3</sup>–10<sup>7</sup>拷贝/μL梯度。
RNA提取（若适用）：需额外进行反转录步骤（50℃ 30 min）。
2. PCR反应体系（20–40 μL）
| 组分 | 样品管（μL） | 阴性对照（μL） | 阳性对照（μL） |
| PCR缓冲液 | 10 | 10 | 10 |
| 酶混合液 | 2 | 2 | 2 |
| 引物-探针混合液 | 2 | 2 | 2 |
| 模板DNA/RNA | 5 | — | — |
| 超纯水 | — | 5 | — |
| 阳性对照稀释液 | — | — | 5 |
3. 扩增程序
| 步骤 | 温度 | 时间 |
| 预变性 | 95℃ | 5–10 min |
| 循环扩增（35–40次）| 95℃ | 15 sec |
| | 57–60℃ | 15–60 sec（荧光采集） |
| 终延伸 | 72℃ | 10 min |
结果判读
定量分析：以Ct值为纵轴，标准品log浓度为横轴绘制曲线，计算样本拷贝数。
定性分析：
阳性：Ct ≤ 35（FAM通道扩增曲线显著）。
可疑：35 < Ct < 40，需复测。
阴性：Ct ≥ 40或无扩增。
注意事项
分区操作：样本处理、试剂配制、扩增需在独立区域进行，避免气溶胶污染。
质量控制：每次实验需包含阴/阳性对照，若对照异常则实验无效。
保存与运输：-20℃保存，有效期12个月；运输需使用干冰或冰袋（2–8℃）。
安全规范：实验废弃物需按生物危害物处理，工作台需用10%次氯酸消毒。
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