检测原理
基于实时荧光定量PCR（探针法），通过Taq酶的5'→3'外切酶活性水解探针，释放荧光报告基团（如FAM），实现靶基因的定量与定性分析。探针设计针对熟地黄高度保守序列，确保特异性。
产品名称 | 熟地黄探针法PCR鉴定试剂盒 | 英文名称 | Radix Rehmanniae Preparata Probe-based PCR Identification Kit |
产品规格 | 50T | 产品分类 | 荧光定量PCR |
检测类型 | PCR检测 | 产品货号 | PR4972 |
产品组成
| 成分 | 规格 | 功能说明 |
| qRT-PCR缓冲液 | 500μL | 提供反应体系基础环境 |
| qRT-PCR酶混合液 | 100μL | 含逆转录酶、Taq酶等 |
| 荧光PCR模板稀释液 | 1 mL | 用于标准曲线样品稀释 |
| 引物混合液 | 100μL | 特异性扩增熟地黄靶序列 |
| qRT-PCR探针 | 50μL | 5'端标记FAM，3'端淬灭基团 |
| 阳性对照（1×10⁸拷贝/μL） | 50μL | 无传染性DNA片段，用于质控 |
| 说明书 | 1份 | 操作指南及数据分析方法 |
实验步骤
1. 标准曲线制备（10²~10⁷拷贝/μL梯度）
使用阳性对照按10倍梯度稀释，冰上操作避免降解。
2. RNA提取
推荐配套柱式RNA提取试剂盒，或兼容其他商业试剂盒。
3. qRT-PCR反应体系（20μL）
| 成分 | 体积（μL） |
| qRT-PCR缓冲液 | 10 |
| 酶混合液 | 2 |
| 探针 | 1 |
| 引物混合液 | 2 |
| RNA模板 | 5 |
4. 扩增程序
| 步骤 | 温度 | 时间 | 荧光采集（FAM通道） |
| 逆转录 | 50℃ | 30 min | 否 |
| 预变性 | 94℃ | 10 min | 否 |
| 扩增（40循环） | 94℃ | 15 sec | 否 |
| | 60℃ | 1 min | 是 |
数据分析
定量分析：以标准曲线log值为横轴、Ct值为纵轴，计算样本浓度。
定性判定：
阳性：Ct≤35，扩增曲线呈S型；
阴性：Ct≥40；
可疑（35<Ct<40）：需复测确认。
注意事项
分区操作：样本制备、扩增需在不同区域进行，避免交叉污染。
阴性对照：必须设置无模板对照（NTC），确保试剂无污染。
探针避光：避免反复冻融，防止荧光淬灭。
生物安全：阳性对照为非活体片段，但仍需按实验室规范处置。
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