检测原理

基于实时荧光定量PCR(qPCR)探针法技术:
探针设计:5'端标记荧光报告基团(如FAM),3'端标记淬灭基团。当探针完整时,荧光信号被淬灭;PCR扩增时,Taq酶切割探针,释放荧光信号。
定量分析:通过监测荧光强度增长(Ct值)实现靶基因的定量或定性检测。
产品名称 | 地黄探针法PCR鉴定试剂盒 | 英文名称 | Radix Rehmanniae Probe-based PCR Identification Kit |
产品规格 | 50T | 产品分类 | 荧光定量PCR |
检测类型 | PCR检测 | 产品货号 | PR5140 |

产品组成

| 编号 | 成分 | 规格 |
| 试剂一 | 探针法qRT-PCR缓冲液 | 500μL |
| 试剂二 | 探针法qRT-PCR酶混合液 | 100μL |
| 试剂三 | 荧光PCR专用模板稀释液 | 1 mL |
| 试剂四 | 地黄探针法qRT-PCR引物混合液 | 100μL |
| 试剂五 | 地黄qRT-PCR探针 | 50μL |
| 试剂六 | 阳性对照(1×10⁸拷贝/μL) | 50μL |
| 其他 | 说明书 | 1份 |
产品特点

高特异性:引物及探针针对地黄保守基因序列设计,避免交叉反应。
高灵敏度:最低检测限可达10²拷贝/μL。
即开即用:用户仅需提供样品RNA模板。
内控设计:含阳性对照,可区分假阴性结果。
适用范围:仅限科研使用,不可用于临床诊断。
操作步骤

1. 标准曲线制备(6个梯度稀释,10²~10⁷拷贝/μL):
使用阳性对照按10倍梯度稀释,避免交叉污染。
2. 样品RNA提取:
推荐使用柱式RNA提取试剂盒,或兼容的其他方法。
3. qPCR反应体系(20μL):
| 成分 | 体积(μL) |
| 探针法缓冲液 | 10 |
| 酶混合液 | 2 |
| 地黄探针 | 1 |
| 引物混合液 | 2 |
| 样品RNA/标准品/阴性对照 | 5 |
4. 反应程序:
| 步骤 | 温度 | 时间 |
| 逆转录 | 50℃ | 30 min |
| 预变性 | 94℃ | 10 min |
| 扩增(40循环) | 94℃ | 15 sec |
| | 60℃ | 1 min(采集荧光) |
数据分析
定量检测:以标准曲线log值为横轴、Ct值为纵轴,计算样品浓度。
定性检测:
阳性:Ct≤35,扩增曲线呈典型S型。
阴性:Ct≥40。
可疑(35<Ct<40):需重复检测。
注意事项

储存条件:-20℃避光保存,避免反复冻融。
防污染措施:分区操作(样品制备区、扩增区),使用带滤芯枪头。
质量控制:每批次实验需包含阴性对照(无模板)和阳性对照。
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