黄芩探针法PCR鉴定试剂盒
商品属性
产品名称
英文名称
Radix scutellariae Probe-based PCR Identification Kit
规格
50T
货号
PR5083
产品概述
本试剂盒基于探针法荧光定量PCR技术，专用于黄芩（Radix Scutellariae）的快速、高特异性分子鉴定。通过优化引物和探针设计，靶向黄芩基因组高度保守区域，确保检测的灵敏性和准确性，适用于科研用途。
产品组成
PCR预混液：含Taq DNA聚合酶、dNTPs、Mg²⁺及缓冲体系。
阳性对照：无传染性黄芩DNA片段（1×10⁸拷贝/μL）。
荧光PCR模板稀释液：用于标准曲线制备。
阴性对照：无核酸酶水。
实验步骤
1. 标准曲线制备（10倍梯度稀释）
标记离心管（6管），依次加入45μL稀释液，按说明书步骤稀释阳性对照至10¹~10⁶拷贝/μL。
注意：操作需在独立洁净区进行，避免交叉污染。
2. 样本DNA提取
推荐使用柱式核酸提取试剂盒或免提取释放剂，粗提DNA需满足纯度要求（A260/A280≈1.8~2.0）。
3. PCR反应体系配置（20μL/反应）
| 组分 | 体积（μL） |
| 预混液 | 15 |
| 引物探针混合液| 2 |
| 模板DNA | 3 |
4. 扩增程序（以ABI 7500为例）
预变性：95℃ 3分钟；
循环阶段（40 cycles）：95℃ 15秒 → 60℃ 1分钟（采集FAM通道荧光）。
结果分析
质控标准
阴性对照：Ct≥40或无扩增曲线。
阳性对照：Ct≤35，典型指数扩增。
样本判定：
阳性：Ct<38，扩增曲线明显；
可疑：38≤Ct<40，需复测确认；
阴性：Ct≥40或无Ct值。
定量分析
以标准曲线log值为横轴、Ct值为纵轴，计算样本拷贝数。
注意事项
分区操作：样本处理、试剂配制、扩增需在不同区域进行。
避免污染：使用带滤芯枪头，操作台定期用10%次氯酸消毒。
反复冻融：试剂解冻后需短暂离心，避免多次冻融。
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