黄芪探针法PCR鉴定试剂盒
商品属性
产品名称 | 黄芪探针法PCR鉴定试剂盒 | 英文名称 | Radix astragali Probe-based PCR Identification Kit |
规格 | 50T | 货号 | PR5082 |
检测原理
基于实时荧光定量PCR（qPCR）技术，采用探针法原理：
探针设计：5'端标记荧光报告基团（如FAM），3'端标记淬灭基团（如NFQ），探针与靶序列特异性结合。
信号释放：PCR扩增时，Taq酶的5'→3'外切酶活性切割探针，使报告基团与淬灭基团分离，释放荧光信号。
定量分析：通过监测荧光强度增长（Ct值）实现靶序列的定性和定量检测。
产品组分
| 编号 | 成分 | 规格 |
| 试剂一 | 探针法qPCR缓冲液 | 500μL |
| 试剂二 | qPCR酶混合液（含逆转录酶） | 50-100μL |
| 试剂三 | 荧光PCR模板稀释液 | 1mL |
| 试剂四 | 黄芪特异性引物-探针混合液 | 100μL |
| 试剂五 | 阳性对照（1×10^8拷贝/μL） | 50μL |
| 试剂六 | 说明书 | 1份 |
实验步骤
1. 标准曲线制备（6个梯度稀释）
使用阳性对照按10倍梯度稀释（10^7~10^2拷贝/μL），独立操作避免污染。
2. 样本处理
RNA提取：推荐柱式提取法，需设置阴性对照（NC）和阳性对照（PC）。
反转录：50℃ 30分钟（若检测RNA）。
3. qPCR反应体系（20μL）
| 成分 | 体积 |
| qPCR缓冲液 | 10μL |
| 酶混合液 | 2μL |
| 引物-探针混合液 | 2μL |
| 模板DNA/RNA | 5μL |
| 超纯水 | 补至20μL |
4. 扩增程序
| 步骤 | 温度 | 时间 | 循环数 |
| 逆转录 | 50℃ | 30 min | 1 |
| 预变性 | 94℃ | 10 min | 1 |
| 变性 | 94℃ | 15 sec | 40 |
| 退火/延伸 | 60℃ | 1 min | 40 |
5. 数据分析
定量：以标准曲线log值为横轴，Ct值为纵轴，计算样本浓度。
定性：阴性对照Ct≥40；阳性对照Ct≤30；样本Ct≤35判为阳性。
注意事项
防污染：分区操作（样本处理、试剂配制、扩增），使用带滤芯枪头。
质量控制：每批次实验需包含阴/阳性对照。
重复性：临界值样本（Ct 35-40）需复测确认。
局限性：
基因突变可能导致假阴性；
提取效率差异可能影响定量准确性。
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