产品概述
本试剂盒基于探针法荧光定量PCR技术，专用于山慈菇DNA的特异性鉴定。通过优化引物和探针，实现对目标序列的高灵敏、高特异性检测，适用于定性及定量分析（线性范围≥5个数量级）。
产品名称
山慈菇探针法PCR鉴定试剂盒
英文名称
Pseudobulbus Cremastrae seu Pleiones Probe-based PCR Identification Kit
产品规格
50T
产品分类
荧光定量PCR
检测类型
PCR检测
产品货号
PR4988
产品组成
预混液：含Taq酶、dNTPs、缓冲液等。
引物与探针：针对山慈菇DNA高度保守区设计，避免交叉反应。
阳性对照：无传染性DNA片段（1×10^7拷贝/μL）。
模板稀释液：用于标准曲线制备。
阴性对照：无核酸酶水。
实验步骤
1. 标准曲线制备
稀释：将阳性对照按10倍梯度稀释（10^1–10^6拷贝/μL），标记离心管（6–1号），每管加入45μL稀释液及5μL上一步稀释产物，涡旋混匀。
注意事项：操作需在独立区域进行，避免污染。
2. 样本DNA提取
使用商业提取试剂盒或柱式法纯化样本DNA，建议设置阴性/阳性对照（N+2个样本）。
3. PCR反应体系（20μL）
| 组分 | 体积（μL） |
| 预混液 | 10 |
| 引物探针混合液 | 2 |
| 模板DNA | 2 |
| 无核酸酶水 | 6 |
程序设置：
预变性：95℃, 3分钟；
扩增循环（40次）：95℃ 15秒 → 60℃ 1分钟（采集荧光信号）。
4. 数据分析
定量检测：以标准曲线log值为横轴，Ct值为纵轴，计算样本浓度。
定性检测：阴性对照Ct≥40，阳性对照Ct≤36；样本Ct≤36判为阳性。
注意事项
操作规范：
分区分步操作（样本处理、试剂配制、加样需独立进行）。
使用带滤芯枪头，避免气溶胶污染。
储存与运输：
-20℃避光保存，避免反复冻融；
运输需泡沫箱加冰密封。
质量控制：
反应液需完全融化并离心混匀；
实验后工作台需用75%酒精或紫外消毒。
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