海螵蛸探针法PCR鉴定试剂盒
商品属性
产品名称 | 海螵蛸探针法PCR鉴定试剂盒 | 英文名称 | Os Sepiae Probe-based PCR Identification Kit |
规格 | 50T | 货号 | PR5104 |
技术原理
本试剂盒采用实时荧光定量PCR（qPCR）技术，通过特异性探针与靶DNA结合，在扩增过程中释放荧光信号，实现对Endoconcha sepiae DNA的定性和定量检测。
产品组成
探针法qPCR缓冲液（500 μL）
探针法qPCR酶混合液（50 μL）
荧光PCR专用模板稀释液（1 mL）
PCR引物-探针干粉（50T）
阳性对照（10^7 拷贝/μL，50 μL）
阴性对照（超纯水）
产品特点
高特异性：引物和探针经生物信息学优化，仅靶向海螵蛸特异性基因序列，无交叉反应。
高灵敏度：最低检测限达10^3拷贝/μL，无需预增菌。
快速高效：全程检测时间3-4小时，覆盖临床及环境样本。
双重质控：提供阳性和阴性对照，确保结果可靠性。
兼容性广：适用于组织、细胞、血液等多种样本类型。
实验步骤
1. 标准曲线制备（定量分析）
将阳性对照10倍梯度稀释（10^1–10^6拷贝/μL），每个浓度设3复孔。
反应体系（20 μL）：
qPCR缓冲液：10 μL
酶混合液：2 μL
引物-探针：2 μL
模板DNA：5 μL
2. 样本处理
DNA提取：推荐使用商业化DNA提取试剂盒，避免交叉污染。
阴性对照：超纯水替代模板。
3. qPCR程序
| 步骤 | 温度 | 时间 | 循环数 |
| 逆转录 | 50℃ | 30 min | 1 |
| 预变性 | 94℃ | 10 min | 1 |
| 扩增 | 94℃ | 15 sec | 40 |
| | 60℃ | 1 min（采集FAM信号） |
数据分析
定量检测：以Ct值为纵轴，标准曲线log值为横轴，计算样本浓度。
定性检测：
阳性：Ct ≤ 39，且有典型扩增曲线。
阴性：Ct ≥ 40或无扩增。
可疑：39 < Ct < 40，需复测。
注意事项
分区操作：样本处理、试剂配制、扩增需在不同区域进行。
防污染：使用带滤芯枪头，实验后以10%次氯酸或75%乙醇清洁台面。
避免反复冻融：试剂解冻后需混匀并短暂离心，分装保存。
局限性：
基因突变可能导致假阴性；
提取效率差异可能影响定量准确性。
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