干姜探针法PCR鉴定试剂盒

干姜探针法PCR鉴定试剂盒

商品属性

产品概述

本试剂盒基于探针法荧光定量PCR技术，专用于干姜（Rhizoma zingiberis）的核酸定性及定量检测。通过特异性引物和探针设计，可高效识别干姜DNA/RNA，灵敏度高（最低检测限达1×10³拷贝/mL），线性范围覆盖5个数量级（10²~10⁸拷贝/μL）。适用于科研用途，严禁临床诊断。

试剂盒组成

| 编号 | 成分 | 规格 |

| 试剂一 | 探针法qPCR缓冲液 | 500 μL |

| 试剂二 | 探针法qPCR酶混合液 | 50-100 μL |

| 试剂三 | 荧光PCR专用模板稀释液 | 1 mL |

| 试剂四 | PCR引物-探针混合液 | 50-150 μL |

| 试剂五 | PCR阳性对照（1×10⁷~10⁸拷贝/μL） | 50 μL |

| 说明书 | 操作手册 | 1份 |

操作流程

1. 标准曲线制备

稀释步骤：以10倍梯度稀释阳性对照（如10⁷→10²拷贝/μL），使用独立区域及带芯枪头避免污染。

标记管号：6管（6→1号）或7管（7→2号），依次加入45 μL稀释液及5 μL上一步稀释产物，涡旋混匀后冰浴备用。

2. 样本处理

核酸提取：推荐使用兼容的DNA/RNA提取试剂盒，设置阴性（NC）和阳性对照（PC）。

模板制备：纯化后的样本DNA/RNA需稀释至适当浓度。

3. qPCR反应体系（20 μL）

| 成分 | 样品管（N+2） | 阴性对照 | 标准曲线管 |

| qPCR缓冲液 | 10 μL | 10 μL | 10 μL |

| 酶混合液 | 2 μL | 2 μL | 2 μL |

| 引物-探针混合液 | 2-3 μL | 2-3 μL | 2-3 μL |

| 模板DNA/RNA | 5-7 μL | — | — |

| 标准曲线稀释液 | — | — | 5-7 μL |

| 超纯水 | 补至20 μL | 补至20 μL| — |

4. 扩增程序

| 步骤 | 温度 | 时间 |

| 逆转录（若需） | 50℃ | 30 min |

| 预变性 | 94-95℃ | 2-10 min |

| 扩增循环（40-45次）| 94℃ | 15 sec |

| | 58-60℃ | 30-60 sec（采集FAM信号） |

数据分析

定量检测：以阳性对照log浓度为横轴、Ct值为纵轴绘制标准曲线，计算样本浓度。

定性检测：

阴性：Ct≥40或无扩增曲线。

阳性：Ct≤39且曲线呈指数增长。

灰区（39<Ct<40）：需重复检测。

注意事项

分区操作：样本处理、试剂配制、扩增需在独立区域进行，避免交叉污染。

质量控制：每次实验需包含阴/阳性对照。

保存条件：

试剂盒：-20℃保存，有效期12个月，避免反复冻融。

样本：短期-20℃，长期-70℃（≤6个月），运输需2-8℃冰袋。

安全规范：实验废弃物需按生物安全标准处理（如10%次氯酸消毒）。

局限性声明

检测结果受样本质量、提取效率及操作规范影响。

基因突变或试剂保存不当可能导致假阴性/假阳性。

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