产品特点
高灵敏度：可检测低至几百拷贝/反应的靶序列。
特异性强：引物及探针基于牛蒡子保守序列设计，避免交叉反应。
即开即用：预混缓冲液、酶混合液及引物探针，用户仅需提供DNA模板。
防污染设计：一管式闭管检测，减少气溶胶污染风险。
适用范围：仅限科研用途，不可用于临床诊断。
产品名称 | 牛蒡子探针法PCR鉴定试剂盒 | 英文名称 | Fructus Arctii Probe-based PCR Identification Kit |
产品规格 | 50T | 产品分类 | 荧光定量PCR |
检测类型 | PCR检测 | 产品货号 | PR5026 |
试剂盒组成
| 成分 | 规格 | 功能说明 |
| qPCR缓冲液 | 500μL | 提供反应体系基础环境 |
| 酶混合液 | 100μL | 含Taq DNA聚合酶及逆转录酶 |
| 荧光PCR探针 | 50μL | 5'端FAM标记，3'端淬灭基团 |
| 引物混合液 | 100μL | 特异性扩增牛蒡子靶序列 |
| 阳性对照（1×10^8拷贝/μL） | 50μL | 标准曲线制备及质控 |
| 模板稀释液 | 1mL | 用于阳性对照梯度稀释 |
实验操作流程
1. 标准曲线制备（6个梯度稀释）
标记离心管（7至2号），每管加45μL模板稀释液。
从7号管（初始浓度1×10^8拷贝/μL）开始，依次10倍稀释至2号管（1×10^3拷贝/μL），震荡混匀后冰浴备用。
2. 样品DNA提取
建议设置阴性对照（NC，纯水）和阳性对照（PC，稀释后的阳性标准品）。
使用兼容的DNA提取试剂纯化样本，避免RNA酶污染。
3. qPCR反应体系（20μL）
| 组分 | 体积（μL） |
| qPCR缓冲液 | 10 |
| 酶混合液 | 2 |
| 探针 | 1 |
| 引物混合液 | 2 |
| 模板DNA | 5 |
4. 反应程序
逆转录：50℃ 30分钟（若含RNA步骤）。
预变性：94℃ 10分钟。
扩增循环（40次）：94℃ 15秒 → 60℃ 1分钟（采集FAM荧光信号）。
质控标准
阴性对照：无扩增曲线或Ct值≥40。
阳性对照：Ct值≤32，扩增曲线呈典型指数期。
标准曲线：R²≥0.98，扩增效率90%~110%。
注意事项
实验分区操作（试剂配制、样本处理、扩增区分离）。
使用无核酸酶耗材（带滤芯枪头、灭菌离心管）。
避免反复冻融试剂，分装后使用。
探针避光保存，防止荧光淬灭。
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