产品原理
本试剂盒基于实时荧光定量PCR（qPCR）探针法技术，通过Taq酶的5'→3'核酸外切酶活性切割与靶序列特异性结合的荧光标记探针。探针5'端标记报告基团（如FAM），3'端标记淬灭基团，扩增过程中荧光信号与产物累积量成正比，实现高灵敏度、高特异性的核酸定量检测。
产品名称 | 牵牛子探针法PCR鉴定试剂盒 | 英文名称 | Semen Pharbitidis Probe-based PCR Identification Kit |
产品规格 | 50T | 产品分类 | 荧光定量PCR |
检测类型 | PCR检测 | 产品货号 | PR5011 |
产品特点
高特异性：引物及探针针对牵牛子保守序列设计，无交叉反应。
灵敏度高：检测下限可达10²拷贝/μL。
便捷性：预混缓冲液与酶体系，用户仅需提供RNA模板。
质控完善：含阳性对照（1×10⁸拷贝/μL）及阴性对照，避免假阴性。
适用范围：仅限科研用途，不可用于临床诊断。
试剂盒组分
| 成分 | 规格/包装量 |
| 探针法qRT-PCR缓冲液 | 500μL |
| qRT-PCR酶混合液 | 100μL |
| 荧光PCR模板稀释液 | 1mL |
| 牵牛子引物混合液 | 100μL |
| 牵牛子探针 | 50μL |
| 阳性对照（1×10⁸拷贝/μL） | 50μL |
| 说明书 | 1份 |
实验步骤
1. 标准曲线制备（10²~10⁷拷贝/μL梯度稀释）
使用专用稀释液对阳性对照进行6个10倍梯度稀释，冰上操作以避免降解。
2. 样品RNA提取
建议设置阴性/阳性对照，推荐使用柱式RNA提取试剂盒。
3. qRT-PCR反应体系（20μL）
| 成分 | 样品管/标准曲线管 | 阴性对照管 |
| qRT-PCR缓冲液 | 10μL | 10μL |
| 酶混合液 | 2μL | 2μL |
| 探针 | 1μL | 1μL |
| 引物混合液 | 2μL | 2μL |
| RNA模板/标准品 | 5μL | - |
| 超纯水 | - | 5μL |
4. 反应程序
| 步骤 | 温度 | 时间 |
| 逆转录 | 50℃ | 30 min |
| 预变性 | 94℃ | 10 min |
| 扩增循环（40次） | 94℃ 15 sec → 60℃ 1 min（采集FAM信号） |
数据分析
定量分析：以标准曲线Ct值计算样品拷贝数。
定性判定：Ct≤35为阳性；Ct≥40为阴性；35<Ct<40需复测。
注意事项
操作分区进行，避免气溶胶污染。
试剂解冻后需涡旋混匀，短暂离心后使用。
探针避光保存，反复冻融不超过3次。
声明：本产品仅供科研使用，严禁用于临床或其他非授权用途。
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