法半夏探针法PCR鉴定试剂盒

法半夏探针法PCR鉴定试剂盒

商品属性

产品概述

本试剂盒采用探针法实时荧光定量PCR（qPCR）技术，专用于法半夏（Rhizoma pinelliae preparatum）的快速、高特异性鉴定。通过靶向保守基因序列设计引物与探针，实现对样本中法半夏成分的定性与定量分析，适用于科研领域（不可用于临床诊断）。

技术参数

产品规格：50次/盒（20μL反应体系）

灵敏度：可检测低至几百拷贝/反应的模板。

特异性：引物及探针经生物信息学验证，与近缘物种无交叉反应。

保存条件：-20℃避光保存，有效期12个月。

运输条件：低温干冰运输。

实验原理

探针法qPCR：

探针5'端标记荧光报告基团，3'端标记淬灭基团。

PCR扩增时，Taq酶切割探针释放荧光信号，信号强度与扩增产物量成正比。

定量分析：通过标准曲线计算起始模板浓度；定性分析通过Ct值判定阳性/阴性。

试剂盒组成

| 成分 | 规格 |

| qRT-PCR缓冲液 | 500 μL |

| 酶混合液 | 100 μL |

| 模板稀释液 | 1 mL |

| 引物混合液 | 100 μL |

| 荧光探针 | 50 μL |

| 阳性对照（1×10^8拷贝/μL） | 50 μL |

样本要求

适用样本：组织匀浆、细胞、细菌培养物等。

样本处理：

液体样本：离心取沉淀，加入DNA抽提液裂解。

固体样本：匀浆后离心，取上清。

保存：短期可存于-20℃，长期需-80℃；避免反复冻融。

操作步骤

1. 标准曲线制备

将阳性对照按10倍梯度稀释（10^2~10^7拷贝/μL），每个浓度作为标准曲线点。

2. DNA提取

采用配套抽提液或商业化试剂盒提取样本DNA，建议使用柱式纯化法。

3. qPCR反应体系

| 组分 | 体积（μL） |

| qPCR缓冲液 | 10 |

| 酶混合液 | 2 |

| 引物混合液 | 2 |

| 荧光探针 | 1 |

| 模板DNA | 5 |

| 总体积 | 20 |

4. 反应程序

| 步骤 | 温度 | 时间 |

| 逆转录 | 50℃ | 30 min |

| 预变性 | 94℃ | 10 min |

| 扩增（40循环） | 94℃ | 15 sec |

| | 60℃ | 1 min |

结果判读

定量分析：根据标准曲线计算样本浓度。

定性分析：

阳性：Ct值≤35，扩增曲线呈典型S型。

阴性：Ct值≥40或无扩增。

可疑：35<Ct<40，需重复检测。

注意事项

分区操作：试剂配制、样本处理、扩增需在独立区域进行，避免污染。

阳性对照需最后加入，防止气溶胶扩散。

实验废弃物需经消毒处理后再丢弃。

声明

本产品仅限科研使用，不适用于临床诊断或治疗。

公司正在出售的产品