过氧化氢（H2O2）检测试剂盒（分光光度法100T/96S） 新品

过氧化氢含量（H2O2）试剂盒说明书

                                                  分光光度法

正式测定前务必取2-3个预期差异较大的样本做预测定                                             

测定意义：

H2O2是生物体内最常见的活性氧分子，主要由SOD和XOD等催化产生，由CAT和POD等催化降解。H2O2不仅是重要的活性氧之一，也是活性氧相互转化的枢纽。一方面，H2O2可以直接或间接地氧化细胞内核酸，蛋白质等生物大分子，并使细胞膜遭受损害，从而加速细胞的衰老和解体；另一方面H2O2也是许多氧化应急反应中的关键调节因子。

测定原理：

H2O2与硫酸钛生成黄色的过氧化钛复合物，在415nm有特征吸收。

试剂的组成和配制：

试剂二：粉剂，4℃保存；临用前加入10ml浓盐酸充分溶解备用。用不完的试剂4℃保存；(溶解时间较长，约30min，可40℃-60℃加热溶解，务必提前准备)

自备仪器和用品：

可见分光光度计、台式离心机、可调式移液器、1 ml玻璃比色皿、丙酮60ml、浓盐酸10ml、研钵和冰。

H2O2提取：

1、细菌或细胞样品的制备：收集细菌或细胞到离心管内，离心后弃上清；按照细菌或细胞数量（104个）：试剂一体积（ml）为500~1000：1的比例（建议500万细菌或细胞加入1ml试剂一），超声波破碎细菌或细胞（冰浴，功率20％或200W，超声3s，间隔10s，重复30次）；用试剂一定容至1ml；8000g 4℃离心10min，取上清，置冰上待测。

2、 组织样品的制备：按照组织质量（g）：试剂一体积(ml)为1：5~10的比例（建议称取约0.1g组织，加入1ml试剂一）进行冰浴匀浆；转移至EP管中，用试剂一定容至1ml，8000g 4℃离心10min，取上清，置冰上待测。

3、血清（浆）样品：直接检测。

测定步骤：

1、分光光度计预热30min以上，调节波长至415nm，蒸馏水调零。

2、将试剂二、三和四37℃（哺乳动物）或25℃（其它物种）水浴10min以上。

3、在EP管中按顺序加入下列试剂

4000g，25℃离心10min，弃上清，留沉淀

加入试剂四溶解沉淀后，室温静置5min，倒入比色皿中，测定415nm处吸光值A。对照管只要做一次即可。计算ΔA＝A测定-A对照。

注意事项:

1、由于试剂一易挥发，试剂一必须先预冷再加，研磨时必须在冰上研磨。

2、本试剂盒中试剂的挥发性较高，请带一次性手套和口罩。