脂肪酸合成酶（FAS）检测试剂盒（分光光度法10T/9S）

脂肪酸合成酶（fatty acid synthase，FAS）活性试剂盒说明书

                                                            分光光度法

正式测定前务必取2-3个预期差异较大的样本做预测定                                             

测定意义：

FAS是脂肪酸合成关键酶，催化乙酰辅酶A和丙二酰辅酶A而生成长链脂肪酸。FAS普遍表达于各种组织细胞中，在哺乳动物肝、肾、脑、肺和乳腺以及脂肪组织中表达丰富。

测定原理：

FAS催化乙酰CoA、丙二酰CoA和NADPH生成长链脂肪酸和NADP+；NADPH在340nm有吸收峰，而NADP+没有；通过测定340nm 光吸收下降速率，计算FAS活性。

组成：

FA009-10T/9S:

试剂一：液体10ml×1瓶，－20℃保存。用前取出置于4℃充分解冻后混匀。

试剂二：粉剂×1瓶，4℃保存。临用前加入275 μl试剂四，充分溶解，用不完的试剂分装后-20℃保存，禁止反复冻融。

试剂三：粉剂×1瓶，4℃保存。临用前加入275 μl试剂四，充分溶解，用不完的试剂分装后-20℃保存，禁止反复冻融。

试剂五：粉剂×1瓶，4℃保存。临用前加入525 μl试剂四，充分溶解，用不完的试剂分装后-20℃保存，禁止反复冻融。

FA009-25T/24S:

试剂一：液体25ml×1瓶，－20℃保存。用前1 d取出置于4℃充分解冻后混匀。

试剂二：粉剂×1瓶，4℃保存。临用前加入550 μl试剂四，充分溶解，用不完的试剂分装后-20℃保存，禁止反复冻融。

试剂三：粉剂×1瓶，4℃保存。临用前加入550 μl试剂四，充分溶解，用不完的试剂分装后-20℃保存，禁止反复冻融。

试剂五：粉剂×1瓶，4℃保存。临用前加入1050 μl试剂四，充分溶解，用不完的试剂分装后-20℃保存，禁止反复冻融。

FA009-50T/48S:

试剂一：液体50ml×1瓶，－20℃保存。用前1 d取出置于4℃充分解冻后混匀。

试剂二：粉剂×1瓶。临用前加入1100 μl试剂四，充分溶解，用不完的试剂分装后-20℃保存，禁止反复冻融。

试剂三：粉剂×1瓶，4℃保存。临用前加入1100 μl试剂四，充分溶解，用不完的试剂分装后-20℃保存，禁止反复冻融。

试剂五：粉剂×1瓶，4℃保存。临用前加入2100μl试剂四，充分溶解，用不完的试剂分装后-20℃保存，禁止反复冻融。

自备仪器和用品：

研钵、冰、台式离心机、紫外分光光度计、1ml石英比色皿、可调式移液枪和蒸馏水。

粗酶液提取：

1. 组织：按照组织质量（g）：试剂一体积(ml)为1：5~10的比例（建议称取约0.1g组织，加入1ml试剂一）进行冰浴匀浆。12000g，4℃离心40min，取上清置冰上待测。

2. 细菌、真菌：按照细胞数量（104个）：试剂一体积（ml）为500~1000：1的比例（建议500万细胞加入1ml试剂一），冰浴超声波破碎细胞（功率300w，超声3秒，间隔7秒，总时间3min）；然后12000g，4℃，离心40min，取上清置于冰上待测。

3. 血清等液体：直接测定。

FAS测定操作：

1. 分光光度计预热30min，调节波长到340 nm，蒸馏水调零。

2. 试剂四置于40℃水浴中预热30 min。

3. 测定管：在1ml石英比色皿中依次加入100μl上清液、20μl试剂二、20μl试剂三、820μl试剂四和40μl试剂五，迅速混匀后于340nm处测定吸光值，记录第30s和90s时吸光值，分别记录为A1和A2。△A测=A1-A2。

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