产品概述
本试剂盒基于实时荧光定量PCR（qPCR）技术，采用探针法检测地榆特异性核酸序列。通过优化引物和探针设计，确保高灵敏度和特异性，可有效区分地榆与其他近缘物种。试剂盒包含预混缓冲液、酶混合物、引物探针干粉、阳性对照及模板稀释液，支持50次20μL体系的反应。
产品名称 | 地榆探针法PCR鉴定试剂盒 | 英文名称 | Radix Sanguisorbae Probe-based PCR Identification Kit |
产品规格 | 50T | 产品分类 | 荧光定量PCR |
检测类型 | PCR检测 | 产品货号 | PR5138 |
试剂盒组成
| 编号 | 成分 | 规格 |
| 试剂一 | 探针法qPCR缓冲液 | 500 μL |
| 试剂二 | 探针法qPCR酶混合液 | 50-100 μL |
| 试剂三 | 荧光PCR专用模板稀释液 | 1 mL |
| 试剂四 | PCR引物-探针干粉 | 50反应份 |
| 试剂五 | PCR阳性对照（10^7-10^8拷贝/μL） | 50 μL |
操作步骤
1. 标准曲线制备
使用阳性对照进行10倍梯度稀释（10^1-10^6拷贝/μL），独立操作避免交叉污染。
标记离心管（6-1号），依次加入稀释液和模板，涡旋混匀后冰上保存。
2. 样品DNA提取
建议设置阴性对照（NC）和阳性对照（PC）。
兼容多数商业DNA提取试剂盒，推荐柱式纯化法。
3. qPCR反应体系（20μL）
| 成分 | 样品管（μL） | 阴性对照（μL） | 标准曲线管（μL） |
| qPCR缓冲液 | 10 | 10 | 10 |
| 酶混合液 | 2 | 2 | 2 |
| 引物-探针混合液 | 3 | 3 | 3 |
| 模板DNA/标准品 | 5 | - | 5（对应稀释度） |
| 超纯水 | - | 5 | - |
4. 反应程序
| 步骤 | 温度 | 时间 |
| 预变性 | 94℃ | 10 min |
| 扩增（40循环） | 94℃ | 15 sec |
| | 60℃ | 1 min（采集FAM信号） |
数据分析
定量检测：以标准曲线log值为横轴、Ct值为纵轴，计算样品浓度。
定性检测：Ct≤39为阳性，Ct≥40为阴性；临界值（39-40）需复测。
注意事项
分区操作：样本处理、试剂配制、扩增需在不同区域进行。
防污染措施：使用带滤芯枪头，实验后以10%次氯酸或75%乙醇消毒台面。
保存条件：-20℃避光保存，有效期12个月；反复冻融≤3次。
局限性：
结果受样本质量、提取效率及操作规范影响。
基因突变可能导致假阴性；交叉污染易致假阳性。
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