技术原理
本试剂盒基于实时荧光定量PCR（qPCR）探针法，通过以下步骤实现高特异性检测：
探针设计：5'端标记荧光报告基团（如FAM），3'端标记淬灭基团。当探针与靶序列结合时，Taq酶的5'核酸外切酶活性切割探针，释放荧光信号。
信号检测：荧光强度与扩增产物的量成正比，通过实时监测荧光信号实现定量分析。
产品名称 | 地骨皮探针法PCR鉴定试剂盒 | 英文名称 | Cortex Lycii Probe-based PCR Identification Kit |
产品规格 | 50T | 产品分类 | 荧光定量PCR |
检测类型 | PCR检测 | 产品货号 | PR5141 |
产品特点
高灵敏度：可检测低至10 ng的DNA模板。
高特异性：引物及探针针对地骨皮高度保守区设计，避免交叉反应。
快速便捷：
即开即用，预混试剂减少操作步骤。
全程约3小时（含逆转录、扩增及检测）。
质控保障：提供阳性对照（1×10^8拷贝/μL）和阴性对照，区分假阴性/假阳性。
防污染设计：采用dUTP/UNG酶系统（部分型号）降低残留污染风险。
组分清单
| 成分 | 规格 | 功能 |
| 探针法qPCR缓冲液 | 500 μL | 反应体系基础液 |
| qPCR酶混合液 | 100 μL | 含Taq酶、逆转录酶等 |
| 地骨皮特异性引物混合液 | 100 μL | 靶序列扩增 |
| 地骨皮探针 | 50 μL | 荧光信号生成 |
| 阳性对照（1×10^8拷贝/μL） | 50 μL | 标准曲线制备 |
| 荧光PCR专用稀释液 | 1 mL | 模板稀释 |
操作步骤
1. 标准曲线制备（6个梯度稀释，10^2~10^7拷贝/μL）：
使用阳性对照和稀释液按10倍梯度稀释，冰上保存备用。
2. 样品RNA提取：
推荐使用柱式RNA提取试剂盒，设置阴性/阳性对照。
3. qPCR反应体系（20 μL）：
| 组分 | 体积（μL） |
| qPCR缓冲液 | 10 |
| 酶混合液 | 2 |
| 探针 | 1 |
| 引物混合液 | 2 |
| 模板RNA | 5 |
4. 扩增程序：
逆转录：50℃ 30 min
预变性：94℃ 10 min
扩增循环（40次）：94℃ 15 sec → 60℃ 1 min（采集FAM信号）
结果分析
定量分析：以标准曲线log值为横轴、Ct值为纵轴，计算样本浓度。
定性判断：
阳性：Ct≤35，明显扩增曲线。
可疑：35<Ct<40，需复测确认。
阴性：Ct≥40或无扩增。
注意事项
储存与运输：-20℃避光保存，避免反复冻融。
污染控制：分区操作（样品制备区、扩增区），使用带滤芯枪头。
实验无效标准：
阳性对照Ct>35或阴性对照出现扩增。
假阳性/假阴性风险提示：
避免RNA降解或交叉污染。
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