艾叶探针法PCR鉴定试剂盒

产品概述

本试剂盒基于探针法荧光定量PCR技术，专用于艾叶（Folium Artemisiae Argyi）的快速、高特异性核酸鉴定。通过优化引物和探针设计，可实现定性与定量分析，灵敏度达1×10^1拷贝/μL，线性范围覆盖5个数量级（10^1–10^6拷贝/μL）。

试剂盒组成

| 成分 | 规格 | 功能说明 |

| qPCR缓冲液 | 500μL | 提供反应体系基础环境 |

| qPCR酶混合液 | 50μL | 含热启动DNA聚合酶及逆转录酶 |

| 荧光PCR模板稀释液 | 1mL | 标准品稀释及阴性对照制备 |

| 引物-探针干粉 | 50T | 特异性扩增艾叶靶序列 |

| 阳性对照（10^7拷贝/μL） | 50μL | 标准曲线构建及质控 |

操作流程

1. 标准曲线制备

稀释步骤：以10倍梯度稀释阳性对照（10^7拷贝/μL）至10^1–10^6拷贝/μL，使用带芯枪头避免交叉污染。

注意事项：稀释操作需在独立洁净区进行，冰上保存备用。

2. 样本DNA提取

推荐使用兼容的DNA提取试剂盒，并设置阴性对照（NC，超纯水）和阳性对照（PC，10^4拷贝/μL稀释液）。

3. qPCR反应设置（20μL体系）

| 组分 | 样品管（μL） | 阴性对照（μL） | 标准曲线管（μL） |

| qPCR缓冲液 | 10 | 10 | 10 |

| 酶混合液 | 2 | 2 | 2 |

| 引物-探针混合液 | 3 | 3 | 3 |

| 模板DNA | 5 | — | — |

| 标准品稀释液 | — | — | 5 |

| 超纯水 | — | 5 | — |

反应程序：

逆转录：50℃ 30 min

预变性：94℃ 10 min

40循环：94℃ 15 sec → 60℃ 1 min（采集FAM通道信号）

数据分析

定量检测：以标准曲线（log拷贝数 vs. Ct值）计算样本浓度。

定性判定：

阳性：Ct ≤ 36，扩增曲线呈S型；

阴性：Ct ≥ 40或无扩增；

灰区（36<Ct<40）：需复检确认。

注意事项

分区操作：样本处理、试剂配制、扩增需在独立区域完成。

污染控制：使用一次性耗材，实验后以10%次氯酸或75%乙醇清洁台面。

保存条件：-20℃避光保存，有效期12个月，避免反复冻融。

局限性：

结果受样本质量、提取效率及操作规范影响；

基因变异可能导致假阴性。

公司正在出售的产品