黄鱼源性成分探针法荧光定量PCR试剂盒

黄鱼源性成分探针法荧光定量PCR试剂盒

商品属性

产品原理

本试剂盒基于探针法荧光定量PCR技术，通过特异性引物和荧光标记探针（如TaqMan探针）对黄鱼源性DNA成分进行高灵敏度、高特异性检测。在PCR扩增过程中，探针被Taq酶切割，释放荧光信号，其强度与目标DNA含量成正比，实现定量分析。

实验方法

1. 反应体系配制（冰浴操作）

在无菌0.5 mL离心管中依次加入以下成分：

10×PCR缓冲液：5 μL

dNTP混合物（2 mM）：4 μL

引物1（10 pM）：2 μL

引物2（10 pM）：2 μL

Taq酶（2 U/μL）：1 μL

DNA模板（50 ng–1 μg/μL）：1 μL

加ddH₂O至终体积50 μL

注意：若PCR仪无热盖，需添加石蜡油覆盖反应液。

2. PCR扩增程序

预变性：93℃ 3–5分钟

循环扩增（30–35次）：

变性：93℃ 40秒

退火：58℃ 30秒

延伸：72℃ 60秒

终延伸：72℃ 7分钟

保存：产物可暂存于4℃（短期）或-20℃（长期）。

3. 电泳检测

取5–10 μL PCR产物进行电泳分析。若含石蜡油，需先用100 μL氯仿抽提去除。

注意事项

环境要求：实验需在无DNA污染的专用PCR实验室中进行，操作全程佩戴手套。

试剂与耗材：

使用高质量双蒸水（0.22 μm滤膜过滤或高压灭菌）。

试剂分装为单次用量，避免反复冻融。

选用一次性灭菌塑料器皿，玻璃器皿需高压灭菌。

样本处理：DNA模板需冰浴解冻并充分混匀，避免反复冻融。

污染控制：纯化步骤应简化以减少污染风险。

应用领域

适用于食品、饲料、化妆品等产品中黄鱼源性成分的定性与定量检测，满足物种鉴别及质量控制需求。

注：具体操作参数可根据实验条件优化，建议首次使用时设立阳性和阴性对照以确保准确性。

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