鳕鱼源性成分探针法荧光定量PCR试剂盒
商品属性
产品名称 | 鳕鱼源性成分探针法荧光定量PCR试剂盒 | 英文名称 | Cod-derived Component Probe-based Real-time PCR Kit |
规格 | 50T | 货号 | PR5292 |
产品概述
本试剂盒采用探针法荧光定量PCR技术，专门用于检测鳕鱼源性成分。产品基于TaqMan探针原理设计，通过实时监测PCR扩增过程中的荧光信号变化，实现对鳕鱼源性成分的高灵敏度、高特异性检测。
检测原理
本试剂盒采用双标记探针技术（TaqMan探针）：
探针5'端标记荧光报告基团，3'端标记荧光淬灭基团
当探针完整时，报告基团荧光被淬灭基团抑制
PCR扩增过程中，Taq酶5'-3'外切酶活性切割探针，使报告基团与淬灭基团分离，释放荧光信号
通过实时监测荧光信号变化，实现对起始模板的定量分析
产品组成
探针法qRT-PCR缓冲液（500μL）
探针法qRT-PCR酶混合液（100μL）
荧光PCR专用模板稀释液（1mL）
鳕鱼源性成分探针法qRT-PCR引物混合液（100μL）
鳕鱼源性成分qRT-PCR探针（50μL）
鳕鱼源性成分探针法qRT-PCR阳性对照（1×10⁸拷贝/μL，50μL）
产品说明书
产品特点
即开即用：用户只需提供样品RNA模板
高灵敏度：引物和探针经过优化，检测限低
高特异性：针对鳕鱼源性成分高度保守区设计，无交叉反应
内控对照：提供阳性对照，便于区分假阴性结果
稳定可靠：-20℃保存12个月，性能稳定
适用范围
本产品适用于：
食品中鳕鱼源性成分检测
水产品溯源分析
物种鉴定研究
注意：本产品仅限科研使用，不可用于临床诊断。
操作步骤
标准曲线制备
标记6个离心管（7-2号）
每管加入45μL荧光PCR专用模板稀释液
7号管加入5μL阳性对照（1×10⁸拷贝/μL），震荡混匀，得1×10⁷拷贝/μL稀释液
依次进行10倍系列稀释至2号管（1×10²拷贝/μL）
所有稀释液置于冰上待用
样品RNA制备
设置N+2个提取（N样品+1阳性对照+1阴性对照）
使用合适方法提取样品RNA
RNA应保存于液氮、干冰或Trizol液中
PCR反应体系（20μL）
| 成分 | 样品管(N+2) | 阴性对照 | 标准曲线管(2-7) |
| qRT-PCR缓冲液 | 10μL | 10μL | 10μL |
| 酶混合液 | 2μL | 2μL | 2μL |
| qRT-PCR探针 | 1μL | 1μL | 1μL |
| 引物混合液 | 2μL | 2μL | 2μL |
| 样品RNA | 5μL | - | - |
| 超纯水 | - | 5μL | - |
| 标准品 | - | - | 5μL |
PCR反应程序
逆转录：50℃ 30分钟
预变性：94℃ 10分钟
PCR循环（40次）：
94℃ 15秒
60℃ 1分钟（采集FAM通道荧光信号）
结果分析
定量分析
以标准品浓度的对数值为横坐标，Ct值为纵坐标绘制标准曲线
根据样品Ct值计算样品浓度
定性分析
阴性对照Ct值≥40
阳性对照Ct值≤35
样品Ct值≤35判为阳性
注意事项
操作应在独立洁净区域进行，避免交叉污染
稀释阳性对照时应更换枪头
不同批号试剂组分不可混用
实验废弃物应按照生物安全规范处理
本产品不提供活体阳性对照，仅含无传染性DNA片段
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