河豚鱼源性成分探针法荧光定量PCR试剂盒
商品属性
产品名称 | 河豚鱼源性成分探针法荧光定量PCR试剂盒 | 英文名称 | Pufferfish-derived Component Probe-based Real-time PCR Kit |
规格 | 50T | 货号 | PR5295 |
检测原理
基于探针法荧光定量PCR技术：
探针设计：5'端标记荧光报告基团（如FAM），3'端标记淬灭基团，通过Taq酶的5'→3'外切酶活性切割探针，释放荧光信号。
实时定量：通过监测扩增过程中荧光信号的增长（Ct值），实现对河豚鱼源性成分的定性和定量分析。
高特异性：引物及探针针对河豚鱼源性成分高度保守区设计，避免与其他物种交叉反应。
产品组成
| 成分 | 规格/含量 |
| qPCR缓冲液 | 500μL |
| qPCR酶混合液 | 100μL（含逆转录酶） |
| 荧光PCR模板稀释液 | 1mL |
| 引物混合液 | 100μL（特异性引物） |
| 探针 | 50μL（FAM标记） |
| 阳性对照 | 50μL（1×10⁸拷贝/μL） |
| 说明书 | 1份 |
操作步骤
1. 标准曲线制备（10倍梯度稀释）
标记离心管（6管），依次稀释阳性对照至10⁶–10¹拷贝/μL，冰上保存备用。
2. 样本处理
RNA提取：推荐使用柱式病毒RNA提取试剂盒，设置阴性（NC）和阳性对照（PC）。
模板制备：纯化后的RNA需用稀释液调整至适宜浓度。
3. qPCR反应体系（20μL）
| 成分 | 体积（μL） |
| qPCR缓冲液 | 10 |
| 酶混合液 | 2 |
| 探针 | 1 |
| 引物混合液 | 2 |
| 模板RNA/DNA | 5 |
4. 反应程序
| 步骤 | 温度 | 时间 |
| 逆转录 | 50℃ | 30 min |
| 预变性 | 94℃ | 10 min |
| 扩增（40循环） | 94℃ | 15 sec |
| | 60℃ | 1 min（荧光采集） |
数据分析
定量检测：以标准曲线（log拷贝数 vs. Ct值）计算样本浓度。
定性检测：
阳性：Ct值≤36，典型扩增曲线；
阴性：Ct值≥40；
可疑值（36<Ct<40）需复测确认。
注意事项
分区操作：试剂配制、样本处理、扩增需在独立区域进行，避免污染。
质量控制：每批次实验需包含阴/阳性对照。
适用范围：仅限科研使用，不可用于临床诊断。
仪器兼容性：适用于ABI、Bio-Rad、LightCycler等主流荧光定量PCR仪。
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