豚鼠源性成分探针法荧光定量PCR试剂盒
商品属性
产品名称 | 豚鼠源性成分探针法荧光定量PCR试剂盒 | 英文名称 | Guinea Pig-derived Component Probe-based Real-time PCR Kit |
规格 | 50T | 货号 | PR5337 |
产品概述
本试剂盒基于探针法荧光定量PCR技术，专用于检测豚鼠源性成分，具有高灵敏度和特异性。适用于科研领域，不可用于临床诊断。
产品特点
高灵敏度与特异性：引物及探针针对豚鼠源性成分保守区域设计，避免与其他微生物DNA/RNA交叉反应。
双重检测功能：支持定性与定量分析，定量线性范围达5个数量级（10^1–10^6拷贝/μL）。
即开即用：预混缓冲液、酶混合液及优化引物-探针组合，用户仅需提供样品模板。
内控设计：含阳性对照（无传染性DNA片段），便于区分假阴性结果。
稳定保存：-20℃保存，保质期12个月。
包装规格
| 编号 | 成分 | 规格 |
| 试剂一 | 探针法qPCR缓冲液 | 500μL |
| 试剂二 | 探针法qPCR酶混合液 | 50μL/100μL* |
| 试剂三 | 荧光PCR专用模板稀释液 | 1mL |
| 试剂四 | PCR引物-探针干粉/混合液 | 50T/100μL* |
| 试剂五 | 阳性对照（10^7–10^8拷贝/μL） | 50μL |
操作流程
1. 标准曲线制备（以10倍梯度稀释为例）
标记6管（7–2号），每管加45μL稀释液。
7号管加入5μL阳性对照（10^8拷贝/μL），震荡混匀得10^7拷贝/μL标准品，依次稀释至10^2拷贝/μL。
2. 样品DNA/RNA提取
建议设置N+2样本（含阳性/阴性对照），使用兼容的提取试剂盒纯化模板。
3. qPCR反应体系（20μL）
| 成分 | 样品管（μL） | 阴性对照（μL） | 标准曲线管（μL） |
| qPCR缓冲液 | 10 | 10 | 10 |
| 酶混合液 | 2 | 2 | 2 |
| 引物-探针混合液 | 2 | 2 | 2 |
| 模板（样品/标准品） | 5 | — | 5（对应梯度） |
| 超纯水 | — | 5 | — |
4. 反应程序
逆转录：50℃ 30 min（RNA模板需此步骤）。
预变性：94℃ 10 min。
40循环：94℃ 15 sec → 60℃ 1 min（采集FAM信号）。
数据分析
定量：以标准品log拷贝数为横轴、Ct值为纵轴绘制曲线，计算样品浓度。
定性：Ct≤39为阳性，≥40为阴性；39–40间需复测。
注意事项
分区操作：样本处理、试剂配制、加样需在不同区域进行，避免交叉污染。
质量控制：每次实验需包含阴/阳性对照。
保存条件：试剂避光保存，反应液避免气泡。
生物安全：实验废弃物按《微生物实验室生物安全通则》处理。
局限性
结果受样本质量、提取效率及运输条件影响。
基因突变可能导致假阴性；污染风险可致假阳性。
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