酵母菌属通用探针法荧光定量PCR试剂盒
商品属性
产品名称 | 酵母菌属通用探针法荧光定量PCR试剂盒 | 英文名称 | Yeast Genus Universal Probe-based Real-time PCR Kit |
规格 | 50T | 货号 | PR5313 |
产品概述
本产品是基于TaqMan探针法荧光定量PCR技术开发的酵母菌属通用检测试剂盒，适用于酵母菌属的快速、高灵敏度检测。产品采用优化的引物探针组合，针对酵母菌属DNA高度保守区域设计，具有优异的特异性和灵敏度。
产品特点
即开即用型试剂盒，用户只需提供待测DNA模板
分析灵敏度高达100拷贝/反应
特异性强，不与其它微生物DNA发生交叉反应
提供阳性对照（1×10⁷拷贝/μL），便于实验质量控制
线性范围宽，覆盖5个数量级，适用于定量分析
采用五孔盒包装，组分明确，使用方便
试剂盒组成
| 组分 | 规格 | 包装 |
| 2×Probe qPCR MasterMix | 0.5mL | 0.5mL本色盖管 |
| 荧光PCR专用模板稀释液 | 1mL | 1.5mL绿盖管 |
| 超纯水 | 1mL | 1.5mL蓝盖管 |
| 引物-探针干粉混合物 | 50次 | 0.5mL棕色管 |
| 阳性对照(1×10⁷拷贝/μL) | 50μL | 0.5mL黄盖管 |
| 使用说明书 | 1份 | - |
实验前准备
自备试剂：样品DNA提取试剂、无菌PCR管、带滤芯枪头
仪器设备：荧光定量PCR仪、微量移液器、离心机、冰盒
实验分区：建议在样品制备区、试剂配制区和扩增区三个独立区域操作
使用方法
标准曲线制备（以6个10倍稀释度为例）
标记6个离心管为1-6号
每管加入45μL模板稀释液
在6号管中加入5μL阳性对照，震荡混匀，得到1×10⁶拷贝/μL标准品
依次进行10倍系列稀释至1号管（1×10¹拷贝/μL）
所有稀释标准品置于冰上备用
样品DNA制备
建议设置N+2个提取（N样品+阳性对照+阴性对照）
使用合适的DNA提取方法纯化样品DNA
定量测定DNA浓度并调整至合适浓度
PCR反应体系配制（20μL体系）
| 组分 | 样品管 | 阴性对照 | 标准曲线管 |
| 2×Probe MasterMix | 10μL | 10μL | 10μL |
| 引物-探针混合液 | 3μL | 3μL | 3μL |
| 样品DNA | 7μL | - | - |
| 超纯水 | - | 7μL | - |
| 标准品 | - | - | 7μL |
PCR扩增程序
| 步骤 | 温度 | 时间 | 循环数 |
| 预变性 | 95℃ | 5min | 1 |
| 变性 | 95℃ | 10s | 45 |
| 退火/延伸 | 60℃ | 40s | 45 |
| (采集FAM通道荧光信号) | | | |
数据分析
定量分析
以标准品拷贝数对数值为横坐标，Ct值为纵坐标绘制标准曲线
根据样品Ct值计算待测样品中目标DNA的拷贝数
定性分析
阴性对照：无Ct值或Ct≥40
阳性对照：有明显扩增曲线，Ct<40
待测样品：Ct<40判为阳性，无Ct或Ct≥40判为阴性
注意事项
实验前请仔细阅读说明书，严格按照操作步骤进行
引物-探针干粉使用前需短暂离心，加入165μL超纯水重悬
不同批号试剂组分不可混用
避免反复冻融，未用完试剂需-20℃保存
本产品仅限科研使用，不适用于临床诊断
建议佩戴手套操作，避免核酸污染
质量控制
阳性对照应有典型扩增曲线且Ct值<40
阴性对照应无扩增信号或Ct值≥40
标准曲线相关系数R²应≥0.98
如质控不合格，建议重新实验或联系技术支持
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