杏仁源性成分探针法荧光定量PCR试剂盒
商品属性
产品名称 | 杏仁源性成分探针法荧光定量PCR试剂盒 | 英文名称 | Almond-derived Component Probe-based Real-time PCR Kit |
规格 | 50T | 货号 | PR5321 |
预期用途
本试剂盒基于探针法荧光定量PCR技术，专用于检测样品中杏仁源性成分的DNA，适用于科研实验，不可用于临床诊断。
产品规格与组成
核心组分：
探针法qPCR缓冲液（500μL）
Taq酶混合液（含逆转录酶，100μL）
荧光PCR专用模板稀释液（1mL）
杏仁源性成分特异性引物及探针混合液（引物混合液100μL，探针50μL）
阳性对照（1×10^8拷贝/μL，50μL）
阴性对照（250μL）
规格：50次/盒（20μL反应体系）。
技术原理
采用TaqMan探针法：
探针设计：5'端标记荧光报告基团（如FAM），3'端标记淬灭基团，通过Taq酶的5'→3'外切酶活性切割探针，释放荧光信号。
定量分析：实时监测扩增过程中荧光强度变化，通过标准曲线计算目标DNA拷贝数。
操作步骤
1. 标准曲线制备（10^2–10^7拷贝/μL梯度稀释）
稀释阳性对照：
取7管，1号管加90μL稀释液，其余各加45μL。
从阳性对照（10^8拷贝/μL）取10μL加入1号管，依次10倍稀释至6号管，7号管为阴性对照。
保存：分装后-20℃避光保存，避免反复冻融。
2. 样品DNA制备
推荐方法：使用配套裂解液或兼容的核酸提取试剂盒，确保DNA纯度（A260/A280≈1.8–2.0）。
3. PCR反应体系（20μL）
| 成分 | 体积（μL） |
| qPCR缓冲液 | 10 |
| 酶混合液 | 2 |
| 探针 | 1 |
| 引物混合液 | 2 |
| 模板DNA/标准品/对照 | 5 |
4. 扩增程序
| 步骤 | 温度 | 时间 |
| 逆转录（若需） | 50℃ | 30 min |
| 预变性 | 94℃ | 10 min |
| 循环（40次） | 94℃ | 15 sec |
| | 60℃ | 1 min（采集荧光） |
结果判读
标准曲线：以阳性对照log拷贝数为横坐标，Ct值为纵坐标，R²≥0.99。
样本判定：
阳性：Ct值<30，且扩增曲线呈S型。
可疑：Ct值30–35，需复测。
阴性：Ct值≥35或无扩增。
注意事项
防污染：
分设试剂准备区、样本处理区、扩增区。
使用带滤芯吸头及专用耗材。
保存条件：-20℃避光保存，有效期12个月（避免反复冻融>5次）。
适用范围：仅限科研，不适用于临床诊断。
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