冬虫夏草源性成分探针法荧光定量PCR试剂盒
商品属性
产品名称 | 冬虫夏草源性成分探针法荧光定量PCR试剂盒 | 英文名称 | Cordyceps Sinensis-derived Component Probe-based Real-time PCR Kit |
规格 | 50T | 货号 | PR5324 |
产品概述
本产品是基于TaqMan探针法的实时荧光定量PCR试剂盒，专为检测冬虫夏草源性成分而设计。试剂盒针对冬虫夏草基因组中的特定保守序列设计引物和TaqMan荧光探针，通过实时监测PCR反应过程中释放的荧光信号，实现对冬虫夏草源性成分的高灵敏度、高特异性检测。
产品特点
高灵敏度：检测限可达100拷贝/反应
高特异性：引物和探针针对冬虫夏草高度保守区设计，避免与其他DNA发生交叉反应
操作简便：即开即用，用户只需提供样品DNA模板
多功能性：既可用于定性检测，也可用于定量检测（线性范围≥5个数量级）
质量控制：提供阳性对照，便于区分假阴性样品
稳定可靠：50次20μL体系的反应容量，确保实验一致性
规格参数
规格：50次反应
纯度：≥99%
保存条件：-20℃保存
保质期：12个月
运输条件：低温运输
应用领域：科研用途（不可用于临床诊断）
试剂盒组成
| 成分 | 规格 | 包装 |
| 2×Probe qPCR MasterMix | 0.5 mL | 0.5 mL本色盖管 |
| 荧光PCR专用模板稀释液 | 1 mL | 1.5 mL绿色盖管 |
| 超纯水 | 1 mL | 1.5 mL蓝色盖管 |
| 冬虫夏草源性成分qPCR引物-探针混合液 | 150 μL | 0.5 mL棕色管 |
| 冬虫夏草源性成分qPCR阳性对照(1×10E7拷贝/μL) | 50 μL | 0.5 mL黄色盖管 |
| 使用手册 | 1份 | - |
实验原理
本试剂盒采用TaqMan探针技术，探针5'端标记荧光报告基团，3'端标记淬灭基团。在PCR扩增过程中，当Taq酶延伸至探针结合位置时，其5'-3'外切酶活性将探针切割，使报告基团与淬灭基团分离，释放荧光信号。通过实时监测荧光信号的变化，实现对目标序列的定量检测。
使用方法
标准曲线样品制备（以10E1-10E6拷贝/μL为例）
标记6个离心管（6-1号），各加入45μL荧光PCR专用模板稀释液
在6号管中加入5μL阳性对照(1×10E7拷贝/μL)，震荡混匀得1×10E6拷贝/μL标准品
依次进行10倍梯度稀释，获得6个浓度梯度的标准曲线样品
所有稀释操作应在独立区域进行，避免交叉污染
样品DNA制备
建议设置N+2个提取（N个样品+1个阳性对照+1个阴性对照）
使用兼容的DNA提取方法纯化样品DNA
阳性对照可使用4号稀释液（1×10E4拷贝/μL）制备，阴性对照使用水
PCR反应体系（20μL）
| 成分 | 样品管(N+2) | 阴性对照 | 标准曲线管(1-6) |
| 2×Probe qPCR MasterMix | 10μL | 10μL | 10μL |
| 引物-探针混合液 | 3μL | 3μL | 3μL |
| 待测DNA样本 | 7μL | - | - |
| 超纯水 | - | 7μL | - |
| 标准曲线稀释液 | - | - | 7μL |
PCR反应程序
| 步骤 | 温度 | 时间 | 循环数 |
| 预变性 | 95℃ | 5 min | 1 |
| 扩增 | 95℃ | 15 sec | 45 |
| | 60℃ | 1 min | (采集FAM通道信号) |
数据分析
定量分析
以阳性对照浓度的log值为横轴，Ct值为纵轴绘制标准曲线
根据样品Ct值推算DNA浓度
定性分析
阴性对照：无Ct值或Ct≥40
阳性对照：典型扩增曲线，Ct<40
待测样品：Ct<40为阳性，无Ct值或Ct≥40为阴性
注意事项
本产品仅限科研使用，不可用于临床诊断
操作时应分区进行，避免污染
建议使用带滤芯枪头
所有组分使用前应充分解冻并混匀
实验废弃物应按照生物安全规范处理
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