性能参数
灵敏度：可检测低至几百拷贝/反应的靶序列。
特异性：针对百合保守序列设计引物及探针，无交叉反应。
检测方法：探针法（TaqMan探针），5'端标记FAM荧光基团，3'端淬灭基团。
适用范围：科研用途（不可用于临床诊断）。
产品名称 | 百合探针法PCR鉴定试剂盒 | 英文名称 | Bulbus Lilii Probe-based PCR Identification Kit |
产品规格 | 50T | 产品分类 | 荧光定量PCR |
检测类型 | PCR检测 | 产品货号 | PR5205 |
试剂盒组成
| 成分 | 功能描述 |
| qPCR缓冲液 | 含Mg²⁺、dNTPs等反应组分 |
| 热启动Taq酶混合液 | 高扩增效率，减少非特异性产物 |
| 探针及引物混合液 | 预混优化浓度 |
| 阳性对照（1×10⁸拷贝/μL） | 无传染性DNA片段，用于标准曲线建立 |
| 模板稀释液 | 用于阳性对照梯度稀释 |
实验步骤
1. 标准曲线制备（6个梯度稀释）
使用阳性对照按10倍梯度稀释（10²~10⁷拷贝/μL），独立操作避免污染。
2. 样本DNA提取
推荐兼容柱式提取法，需设置阴性/阳性提取对照（N+2原则）。
3. qPCR反应体系（20μL）
| 组分 | 体积（μL） |
| qPCR缓冲液 | 10 |
| 酶混合液 | 2 |
| 探针 | 1 |
| 引物混合液 | 2 |
| 模板DNA | 5 |
4. 反应程序
逆转录（若需）：50℃ 30 min（仅适用于RNA模板）。
预变性：94℃ 10 min。
扩增循环（40 cycles）：94℃ 15 sec → 60℃ 1 min（采集FAM信号）。
质控标准
阳性对照：Ct值≤32，扩增曲线呈指数期。
阴性对照：无扩增曲线或Ct值≥40。
无效实验判定：阳性质控未达标或阴性质控出现扩增。
注意事项
防污染：分区操作（试剂配制、样本处理、扩增区），使用带滤芯枪头。
试剂稳定性：避免反复冻融，分装保存。
模板质量：推荐A260/A280比值1.8~2.0，避免抑制剂残留。
探针避光：操作时需避光以减少荧光淬灭。
常见问题解决
无扩增信号：检查试剂活性、模板完整性或抑制物干扰。
非特异性峰：优化退火温度或重新设计引物/探针。
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