产品概述
本试剂盒基于探针法荧光定量PCR技术，专用于检测锦鲤疱疹病毒（Koi Herpesvirus, KHV）的Sph基因。通过实时监测荧光信号，实现对病毒DNA的定性和定量分析，适用于科研领域（不可用于临床诊断）。
产品名称 | 锦鲤疱疹病毒Sph基因探针法荧光定量PCR试剂盒 | 英文名称 | Koi Herpesvirus Sph Gene Probe-based Real-time PCR Kit |
产品规格 | 50T | 产品分类 | 荧光定量PCR |
检测类型 | PCR检测 | 产品货号 | PR5214 |
产品特点
高灵敏度与特异性：
引物及探针针对Sph基因保守区设计，检测限低至100拷贝/反应，与其他病毒无交叉反应。
提供无传染性DNA片段作为阳性对照，避免假阴性结果。
即开即用：
用户仅需提供样品DNA或RNA（视产品版本而定），试剂盒包含预混缓冲液、酶混合液及优化引物-探针组合。
多重应用：
支持绝对定量（标准曲线法）、相对表达分析及SNP检测。
稳定性：
-20℃避光保存，有效期12个月，避免反复冻融。
规格与成分
| 成分 | 规格/包装 | 主要功能 |
| qPCR缓冲液 | 500 μL | 反应体系基础液 |
| 酶混合液 | 100 μL | 含逆转录酶（若需）及Taq酶 |
| 引物-探针混合液 | 100 μL | 特异性扩增Sph基因 |
| 荧光探针 | 50 μL | 5'端FAM标记，3'端淬灭 |
| 阳性对照（1×10^8拷贝/μL） | 50 μL | 标准曲线制备 |
| 模板稀释液 | 1 mL | 标准品梯度稀释 |
实验流程
1. 标准曲线制备
将阳性对照按10倍梯度稀释（10^2–10^7拷贝/μL），独立操作避免污染。
2. 样品处理
提取待测样本DNA/RNA，建议设置阴性对照（超纯水）及制备对照（阳性样本稀释液）。
3. qPCR反应体系（20 μL）
| 组分 | 体积（μL） |
| 缓冲液 | 10 |
| 酶混合液 | 2 |
| 引物-探针混合液 | 2 |
| 探针 | 1 |
| 模板DNA/RNA | 5 |
4. 扩增程序
逆转录（若需）：50℃ 30 min
预变性：94℃ 10 min
PCR循环（40次）：94℃ 15 sec → 60℃ 1 min（采集FAM信号）
数据分析
定量检测：以标准曲线log值为横轴、Ct值为纵轴，计算样本拷贝数。
定性检测：阴性对照Ct值≥40，样本Ct值低于阈值判为阳性。
注意事项
操作需在独立区域进行，避免气溶胶污染。
探针干粉使用前需离心并溶解于超纯水（165 μL）。
运输及保存需全程-20℃避光，避免反复冻融。
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