检验原理
本试剂盒采用SYBR Green染料法实时荧光定量PCR技术,针对锦鲤疱疹病毒Sph基因的高度保守区域设计特异性引物。在PCR扩增过程中,SYBR Green染料与双链DNA结合后释放荧光信号,通过实时监测荧光强度变化,实现对KHV核酸的定性及定量检测。
产品名称
锦鲤疱疹病毒Sph基因染料法荧光定量PCR试剂盒
英文名称
Koi Herpesvirus Sph Gene Dye-based Quantitative Real-time PCR Kit
产品规格
50T
产品分类
荧光定量PCR
检测类型
PCR检测
产品货号
PR3061
试剂盒组成
PCR预混液(MagicMix 3.0):含Taq DNA聚合酶、dNTPs、缓冲液及SYBR Green染料(1 mL,红盖)。
超纯水:无核酸酶污染(1 mL,亮黄色盖)。
Sph基因特异性引物混合液:优化设计的正向/反向引物(100 μL,白盖)。
阳性对照:含1×10^8拷贝/μL的KHV Sph基因片段(50 μL,黄盖)。
核酸释放剂(试用装):用于样本前处理(1 mL,绿盖,20次用量)。
使用说明书:1份。
运输与储存
低温运输(-20℃避光),-20℃保存,有效期12个月。
阳性对照需单独存放,避免污染其他组分。
操作步骤
反应体系配制(建议冰上操作):
每40μL反应体系包含:
PCR预混液 20μL
引物混合液 2μL
待测DNA模板 5μL
超纯水补足至40μL。
阳性对照:以5μL阳性对照替代待测模板。
扩增程序(以主流qPCR仪为例):
预变性:95℃ 3分钟;
循环阶段(40 cycles):95℃ 15秒 → 60℃ 30秒(采集荧光信号)。
结果判读:
阴性:无扩增曲线或Ct值≥40;
阳性:出现典型S型扩增曲线且Ct值在预期范围内(需与阳性对照比对)。
注意事项
本产品仅限科研使用,不可用于临床诊断。
操作需在无菌环境下进行,避免交叉污染。
建议重复检测3次以提高准确性。
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