检测目标
靶基因：
OXA-23（主要流行碳青霉烯酶基因，介导鲍曼不动杆菌对亚胺培南/美罗培南耐药）
OXA-24/40（常见于西班牙克隆株，导致泛耐药表型）
辅助标记：同步检测blaNDM-1（可选模块，鉴别共携带菌株）。
方法原理
多重荧光PCR：
OXA-23-FAM探针 + OXA-24-HEX探针，内标（Cy5标记16S rRNA基因）监控提取质量。
采用抗抑制剂聚合酶，适配痰液、伤口分泌物等高黏度样本。
适用样本
临床分离株（血平板纯培养物）、支气管肺泡灌洗液（BALF）、脑脊液（CRAB脑膜炎）
环境样本：呼吸机管路表面拭子、ICU物体表面
二、试剂盒组分与操作流程
1. 核心组分
组分 功能说明
PCR预混液 含热启动Taq酶、dUTP/UNG系统（防气溶胶污染）
探针引物混合液 OXA-23-FAM/OXA-24-HEX探针，内标引物（Cy5）
阳性对照 灭活OXA-23/OXA-24双阳性菌株（ATCC BAA-1605）
快速裂解液 含溶菌酶和蛋白酶K，直接裂解细菌（免DNA提取，15分钟出结果）
2. 操作步骤（以痰液样本为例）
样本处理：
痰液+裂解液涡旋震荡，95℃加热5分钟灭活。
PCR扩增（25μL体系）：
95℃ 3min → [95℃ 10s → 60℃ 30s]×40 cycles（FAM/HEX/Cy5同步采集）
三、性能与结果解读
1. 关键参数
指标 性能标准
灵敏度 1 CFU/反应（纯培养物）
特异性 不与OXA-48、KPC等碳青霉烯酶交叉
抗干扰性 耐受20%黏液或5%血液
2. 结果判读
耐药基因阳性：
OXA-23（FAM）Ct≤35 → 提示亚胺培南耐药风险（MIC≥16 μg/mL）。
OXA-24（HEX）Ct≤35 → 提示美罗培南高耐药性（MIC≥32 μg/mL）。
无效检测：内标（Cy5）无信号 → 需复查采样或提取步骤。
四、注意事项
采样时效性
CRAB定植患者需连续3天采样（提高检出率）。
生物安全
泛耐药鲍曼不动杆菌（XDRAB）需BSL-2实验室操作，废弃物需高压灭菌。
局限性
不能区分染色体或质粒携带的OXA基因（需Southern blot验证）。
五、应用场景
临床诊疗：
指导碳青霉烯类抗生素使用（如OXA-23阳性时避免亚胺培南）。
院感暴发调查：
追踪克隆传播链（如ST2型OXA-23流行株）。
抗菌药管理（AMS）：
多粘菌素/替加环素使用前的快速耐药筛查。
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