鲍曼不动杆菌（AB）检测试剂盒（荧光PCR法）

检测目标：特异性检测鲍曼不动杆菌（AB），一种多重耐药性（MDR）条件致病菌，主要引起医院获得性肺炎、血流感染和伤口感染。

方法原理：基于荧光定量PCR，靶向AB的保守基因 （如blaOXA-51或ompA），通过FAM通道检测，搭配内参基因（如人类β-actin，HEX通道）监控样本质量。

适用样本：痰液（呼吸机相关肺炎）、血液培养物、伤口拭子、环境样本（如ICU设备表面）。

检测流程

样本处理

痰液/伤口拭子：加入溶菌酶和蛋白酶K消化（37℃ 30min），离心取上清。

血液培养物：阳性血培养瓶取1 mL，离心后裂解细菌。

DNA提取

推荐磁珠法（如QIAamp DNA Mini Kit），提取后立即检测（避免DNA降解）。

PCR扩增

反应体系：

引物探针：blaOXA-51（FAM）、内参（HEX）。

循环程序：95℃ 3min →（95℃ 15s → 60℃ 45s）×45循环。

结果判读

阳性：Ct≤35（FAM），且内参Ct≤30（临床样本）。

可疑：35<Ct<38，建议复测或测序验证。

3. 性能参数

指标 参数要求

灵敏度 ≤50 CFU/反应（纯培养）

特异性 不与其他不动杆菌（如A. lwoffii）交叉

检出限 10^3 CFU/mL（痰液样本）

抗干扰性 耐受10%黏液或血液成分

4. 注意事项

耐药基因检测：若需同步检测碳青霉烯酶基因（如blaNDM、blaKPC），可扩展为多重PCR。

生物安全：AB为BSL-2病原体，操作需在生物安全柜中进行。

质控要求：每批次含阴性对照（无菌水）、阳性对照（含blaOXA-51质粒）。

5. 应用场景

临床诊断：ICU患者疑似AB感染的快速确诊（如呼吸机相关肺炎）。

院感防控：医院环境（如床栏、呼吸机管路）的污染监测。

耐药性研究：MDR-AB流行株的分子流行病学调查。