人恶性黑色素瘤细胞;A375-LUC-EGFP
产品信息：
1. 细胞基本特性与背景
亲本来源： 源自人恶性黑色素瘤细胞 A375（该细胞系源自一位54岁女性患者的皮肤黑色素瘤组织）。
标记基因：
LUC： 荧光素酶，用于生物发光检测。
EGFP： 增强型绿色荧光蛋白，在蓝光激发下发出绿色荧光。
Puro： 嘌呤霉素抗性基因，用于筛选和维持质粒稳定性。
细胞类型： 肿瘤细胞（恶性黑色素瘤细胞）。
产品名称 | 人恶性黑色素瘤细胞;A375-LUC-EGFP | 英文名称 | A375-LUC-EGFP：A375LUCEGFP |
货号 | AXB10719 | 生长特性 | 贴壁生长 |
生长特性： 贴壁生长。
细胞形态： 上皮细胞样。
关键特征： 该细胞系BRAF V600E突变阳性，常用于靶向治疗及免疫治疗研究。
应用领域： 仅限科研使用，主要用于黑色素瘤机制研究、抗肿瘤药物筛选、活体成像及细胞示踪。
培养条件与完全培养基配置
A375-LUC-EGFP 细胞的培养条件通常沿用 A375 细胞的培养条件。
基础培养基： DMEM（高糖）。
添加成分：
胎牛血清 (FBS)： 10%。
双抗 (Penicillin-Streptomycin)： 1%。
嘌呤霉素 (Puromycin)： 1-10 μg/mL（用于维持筛选压力，防止荧光素酶和EGFP基因丢失。具体浓度请参考供应商说明书，通常维持在2-5 μg/mL即可）。
培养环境：
温度： 37℃。
气相： 5% CO，95% 空气。
湿度： 饱和湿度。
3. 详细培养操作指南
细胞复苏
快速解冻： 将冻存管从液氮中取出，迅速放入 37℃水浴 中，轻轻摇晃，使其在 1 分钟内完全融化。
稀释离心： 用酒精消毒管壁，将细胞悬液缓慢加入含 4-6 mL 预热完全培养基的离心管中混匀。1000 rpm 离心 3-5 分钟。
重悬接种： 弃去上清，加入含嘌呤霉素的完全培养基重悬细胞，接种到 T25 培养瓶中。
静置培养： 次日观察细胞贴壁情况，建议更换新鲜培养基以去除残留的 DMSO。
细胞传代（当细胞密度达 80%-90% 时）
弃液洗涤： 弃去旧培养基，用不含钙镁离子的 PBS 润洗细胞 1-2 次。
消化： 加入 0.25% 胰蛋白酶（Trypsin-EDTA，约 1-2 mL），放入 37℃ 培养箱消化 1-2 分钟。
注意：A375 细胞贴壁较牢，消化时间可能比普通细胞稍长，需在显微镜下观察。
终止消化： 待细胞间隙变大、变圆脱落时，加入含血清的培养基终止消化。
离心分瓶： 将细胞悬液转移至离心管，1000 rpm 离心 5 分钟。弃上清，加入新鲜完全培养基重悬，按 1:2 至 1:3 的比例分装传代。
细胞冻存
收集： 按传代步骤收集处于对数生长期的细胞。
冻存液： 推荐使用 90% FBS + 10% DMSO，或者专用的无血清冻存液。
程序降温： 将冻存管放入程序降温盒，置于 -80℃冰箱 过夜，第二天转入 液氮罐 长期保存。
4. 关键注意事项（必读）
荧光稳定性维护（关键）：
为了维持 LUC 和 EGFP 的稳定表达，建议在平时的培养基中维持 低浓度的嘌呤霉素筛选。
如果发现荧光强度减弱，可以进行高浓度嘌呤霉素的短期筛选以富集阳性细胞。
贴壁较牢：
A375 细胞属于贴壁非常牢固的细胞。传代时需要耐心等待胰酶发挥作用，切勿强行吹打，以免损伤细胞膜。
生长速度：
该细胞生长速度属于中等，倍增时间约为 24 小时左右。传代后通常需要 2-3 天才能长满。
生物安全等级：
属于 BSL-2 细胞，操作时需在生物安全柜中进行，并穿戴适当的防护装备。
总结
A375-LUC-EGFP 是研究黑色素瘤及进行活体成像的“双保险”工具。培养它的核心在于维持抗生素筛选压力（以保证双荧光稳定）和耐心消化（因为贴壁较牢）。只要掌握好这两点，它就能为你提供稳定的发光信号和清晰的荧光图像，助你的科研一臂之力。
公司正在出售的产品：
AQP-2(Mouse Aquaporin 2) ELISA Kit 小鼠水通道蛋白2 | HIV gp41 病毒(抗原)Multi-class antibodies规格： 0.5ml |
Beta-arrestin 1/2(beta-arrestin 1/2) β-抑制蛋白1/2抗原 0.5mg | CCL13 英文名称： 单核细胞趋化蛋白4抗体 0.2ml |
Rhesus antibody Rh BEX4 脑表达X连锁蛋白4抗体 规格 0.2ml | anti-DNase B(Human anti-deoxyribonuclease B) ELISA Kit 人抗DNA酶B抗体 |
phospho-ATF2 (Thr69 + Thr51) 英文名称： 0酸化活化复制因子2抗体 0.1ml | Caspase-13 半胱胺酸蛋白酶蛋白-13(抗原) 0.5mg |
Anti-Phospho-SirT1 (Ser27)/FITC 荧光素标记0酸化沉默调节蛋白1抗体IgGMulti-class antibodies规格： 0.2ml | BMPR- II (Mouse Bone morphogenetic protein receptor II ) ELISA Kit 小鼠骨成型蛋白受体Ⅱ |
CLN3 英文名称： 神经细胞蜡样质脂褐质沉积病蛋白CLN3抗体 0.2ml | HSD17B1 英文名称： 羟类固醇脱氢酶17β抗体 0.1ml |
ACE(Mouse Angiotensin converting enzyme) ELISA Kit 小鼠紧张素转化酶 | DAD1 英文名称： 细胞死亡蛋白1抗体 0.2ml |
Anti-phospho-HDAC8(Ser39) 0酸化组蛋白去乙酰化酶8抗体Multi-class antibodies规格： 0.1ml | CD19(frozen) 浓缩液 0.1ml 进口分装 |
Rhesus antibody Rh Transglutaminase 转谷氨酰胺酶1抗体 规格 0.1ml | 人恶性黑色素瘤细胞;A375-LUC-EGFPAnti-5-HTR1B /FITC 荧光素标记5-羟色胺受体1B抗体IgGMulti-class antibodies规格： 0.2ml |
NPDC1 英文名称： 神经调控蛋白1抗体 0.2ml | (pIKB Alpha)ELISA Kit 大鼠0酸化核因子κB抑制蛋白α |
细胞具体特点如下：
环境与营养：需无菌环境、精确的温度（36-37℃）和pH（7.2-7.4），动物细胞常需血清，植物细胞需激素。
生长方式：贴壁细胞需表面附着，悬浮细胞自由漂浮，半贴壁半悬浮兼具两者特性。
传代与密度：贴壁细胞需胰酶消化传代，悬浮细胞直接分瓶；密度达80%-90%时需传代，避免营养枯竭与代谢抑制。
敏感性：对剪切应力、污染、温度变化敏感，需定期更换培养液清除代谢物。
应用与局限：便于活细胞观察与实验控制，但体外环境与体内存在差异，长期传代可能导致遗传不稳定与去分化。
关键字： A375-LUC-EGFP;人恶性黑色素瘤细胞;贴壁细胞;
上海抚生实业有限公司(Shanghai Fusheng Industrial Co., Ltd.，China)是一家化学、生化和材料科学等领域的科研用研发产品的制造商和供应商， 我们的产品在相当宽的基础科学领域得到广泛的应用。客户包括学术界、工业界和政府的研究和开发实验室以及制药，生物技术，化工/石化行业等具商业规模的企业。
上海抚生实业有限公司(Shanghai Fusheng Industrial Co., Ltd.，China)除包括化学、分析化学、生命科学和材料科学阿凡提(affandi)产品线外。 质量是所有产品和服务最关键的组成部分，我们通过质量和实力赢得客户的信赖。产品的质量是企业的生命。
上海抚生实业有限公司(Shanghai Fusheng Industrial Co., Ltd.，China)是一个值得信赖的，以服务为导向的公司。产品质量是我们的立身之本， 但提供给客户的远不止产品本身，现货库存、包装、应急反应、客户的技术支持等等因素能满足和超越您的期望对我们是同样重要的。我们建立的质量管理流程保证 了高水准的服务和不断追求完美的承诺。对于大多数目录产品库存，可保证当天或第一时间发货，我们也逐渐建立一支业务精炼、服务周到的客服队伍，把满足客户的 需求作为自己的工作宗旨，运用各种方式来满足客户的需求，服务渗透到售前、售中、售后，甚至延伸产品本身之外，我们争取做到出售的不再是简单的产品，而是服务。
上海抚生实业有限公司(Shanghai Fusheng Industrial Co., Ltd.，China)先后与天津中医学院、复旦大学、上海交通大学医学院、上海交通大学、 华东师范大学、第二军医大学、南京大学，暨南大学，南京工业大学，曙光医院、华山医院、瑞金医院、上海有机研究所、中科院上海分院等多家单位建立了良好的合作关系。
本公司可为您提供科研ELISA试剂盒，种属标本齐全,有专门针对人血清、血浆、全血、分泌物、尿液、细胞培养上清液、组织匀浆、组织液等标本的试剂盒； 另有针对各种动物（鼠、兔、牛、马、鸡、猪、狗、山羊、猴、鱼）的科研试剂。